PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

小鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒 ，英文名： pANCA ELISA Kit 金合歡素;刺槐素（標準品）  Acacetin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA檢測試劑盒MouseEndomeiumAibody,EMAb 96T/48T 氯化木蘭花堿（標準品）  Escholine chloride  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒 ，英文名： EMAb ELISA Kit 蒲公英甾醇乙酸酯（標準品）  taraxasteryl acetate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

小鼠顆粒酶A(GZMA)ELISA試劑盒 ，英文名： GZMA ELISA Kit 反式茴香腦（標準品）  cis-Anethol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA檢測試劑盒MousegranzymesA,Gzms-A 96T/48T 喬松素（標準品）  Pinocembrin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒 ，英文名： Gzms-A ELISA Kit 延胡索甲素（標準品）  Corydaline  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

小鼠顆粒酶B(GZMB)ELISA試劑盒 ，英文名： GZMB ELISA Kit 脫氫紫堇堿;去氫紫堇堿（標準品）  Dehydrocorydaline  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標準品

MousegranzymesB,Gzms-BELISAKit 96T/48T

歐夾竹桃苷（標準品）  Oleandrin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒 ，英文名： Gzms-B ELISA Kit

去亞甲基小檗堿（標準品）  Demethyleneberberine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠顆粒酶K(GZMK)ELISA試劑盒 ，英文名： GZMK ELISA Kit

喹乙醇;喹酰胺醇（標準品）  Olaquindox  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%,標準品 小鼠顆粒酶M(GZMM)ELISA試劑盒 ，英文名： GZMM ELISA Kit

喹乙醇;喹酰胺醇  Olaquindox  質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR 小鼠顆粒體蛋白(GRN)ELISA試劑盒 ，英文名： GRN ELISA Kit

路路通酸（標準品）  Liquidambaric acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA試劑盒 ，英文名： sCD30 ELISA Kit
小鼠接觸蛋白1(CN1)ELISA試劑盒 ，英文名： CN1 ELISA Kit 肝素鋰  Heparin lithium  質(zhì)量規(guī)格：>150IU/MG,BR

人β甘露糖苷酶(βManase)ELISA檢測試劑盒Humanβmannosidase,βManaseELISAKit 96T/48T 促胰液素;胰泌素  Secretin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠血管緊張素原(aGT)試劑盒 Rat angiotensinogen,aGT ELISA Kit 麝香草酚  Thymol  質(zhì)量規(guī)格：AR

英文名稱RatinhibinBELISAKit大鼠抑制素B(INHB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 普拉洛芬  Pranoprofen  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

谷氨酸待測樣品處理試劑盒20 普拉洛芬(標準品)  Pranoprofen  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標準品

ELISAKitHPA人乙酰肝素酶規(guī)格：48T/96T 牛血清白蛋白(BSA);牛血清白蛋白組分五  Albumin(bovine fraction V);BSA  質(zhì)量規(guī)格：Purity>98%,分子生物學(xué)級

小鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒 ，英文名： Cav-1 ELISA Kit 萘啶酮酸；萘啶酸  Nalidixic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%

禽腺病毒(FADV)試劑盒熒光-PCR法大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA檢測試劑盒RatAlpha-fetoprotein,AFPELISAKit 96T/48T 糖原,α-1,6 葡聚糖,糖元  Glycogen from oyster  質(zhì)量規(guī)格：BR,>99%,河蚌提取,Type II

人促卵泡素(FSH)試劑盒 human follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit 化乙錠(EB)  Ethidium bromide(EB)  質(zhì)量規(guī)格：>95%

RatsolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 貝西沙星鹽酸鹽  Besifloxacin HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
大鼠纖維細胞(RLF)(5×105) BPH-1, 人前列腺增生細胞 Human羥脯酸測試前處理試劑shēng huà shì jì容量：RT25支/包

大額牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-1聚季銨鹽-10 Polyquaternium-10 68610-92-4 5G 通用試劑

人腎臟上皮細胞(HREpiC)( 5×105 )醋異務(wù)酯;醋醋務(wù)酯;醋醋異務(wù)酯;香蕉水;香蕉油;異務(wù)酯 IsocMyl ccqtctq;γ-Mqthylbutyl qthcnoctq;Bcncnc oil;cMyl ccqtctq;Pqcr oil;3-Mqthyl-1-butcnol ccqtctq 13-9-

CL-0187PK-15(豬腎細胞)5×106cells/瓶×2十八酸乙酯，英文名或英文縮寫：etxyl stearate，級別：LR，95%，規(guī)格：5克

人結(jié)直腸腺癌細胞;HCT-15 [HCT15] 大鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基 100mL(兩性霉素B)

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