儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱(chēng)
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羊肺炎支原體(MO)試劑盒熒光-PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號(hào)
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XG-R63915
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產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號(hào)強(qiáng)
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitsolubleP-selectin,sP-selectin
96T/48T 羅布麻寧;夾竹桃麻素(標(biāo)準(zhǔn)品) Acetovanillone 質(zhì)量規(guī)格:GC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
兔子可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(sCD40L)ELISA檢測(cè)試劑盒Rabbitsolubleclusterofdiffereiation40ligand,sCD40L
96T/48T 羅布麻寧;夾竹桃麻素 Acetovanillone
質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
兔子可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1
96T/48T 虎杖甙/虎杖苷/白藜蘆醇苷 Polydatin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,BR
兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA檢測(cè)試劑盒RabbitsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCR
96T/48T 虎杖甙/虎杖苷/白藜蘆醇苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Polydatin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
兔子可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA檢測(cè)試劑盒Rabbitsolublevasccularcelladhesionmolecule1,sVCAM-1
96T/48T 十八烷醇,1-十八醇(標(biāo)準(zhǔn)品) 1-Octadecanol 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
兔子可溶性粘附分子(Sam)ELISA檢測(cè)試劑盒Rabbitsolubleadhesionmolecules,Sam
96T/48T 十八烷醇,1-十八醇 1-Octadecanol 質(zhì)量規(guī)格:>98%
兔子球蛋白A(IgA)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitImmunoglobulinA,IgA
96T/48T Ruxolitinib (INCB018424)
Ruxolitinib (INCB018424) 質(zhì)量規(guī)格:>99%
兔子球蛋白E(IgE)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitImmunoglobulinE,IgE
96T/48T MK-1775,MK1775 MK-1775 質(zhì)量規(guī)格:>98%,Wee1激酶抑制劑
兔子球蛋白G(I羊肺炎支原體(MO)試劑盒熒光-PCR法gG)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitImmunoglobulinG,IgG
96T/48T PD184352 (CI-1040) PD-184352
(CI-1040) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,MEK1/2抑制劑
兔子球蛋白M(IgM)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitImmunoglobulinM,IgM
96T/48T 2-脫氧-D-葡萄糖
2-Deoxy-D-glucose 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
虎杖甙/虎杖苷/白藜蘆醇苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Polydatin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA檢測(cè)試劑盒RabbitsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit
96T/48T
十八烷醇,1-D-F[=4-(氨磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(N)(T)) ABD-F
[=4-(Aminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole] 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(N)(T)
Humanai-apolipoproteinA1aibody,ApoA1ELISAKit 人抗載脂蛋白抗體A1(ApoA1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 二茂鐵乙酸(>97.0%(GC)) Ferroceneacetic Acid 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
HumanAldolase,ALDELISA試劑盒人縮酶(ALD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T (肼基羰基)二茂鐵(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記) (Hydrazinocarbonyl)ferrocene 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記
植物S腺苷同型半胱氨酸核苷酶(AdoHcynucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20 二甲亞砜(>99.0%(GC)) Dimethyl Sulfoxide 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
Mouse6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISAKit小鼠6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1,2,3,4-四氫萘(>98.0%(GC) 1,2,3,4-Tetrahydronaphthalene 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
小鼠可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)ELISA試劑盒 ,英文名: LGALS3BP ELISA
Kit 對(duì)茴香醛乙醇溶液(含乙酸和硫酸) p-Anisaldehyde (contains Acetic Acid, H2SO4)
Ethanol Solution 質(zhì)量規(guī)格:用于薄層色譜顯色劑
人可溶性腺苷酸環(huán)化酶(sAC)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanSolubleAdenylateCyclase,sACELISAKit
96T/48T 二甲亞砜-d6 99.9原子%D(>99.0%(GC))
Dimethyl Sulfoxide-d6 99.9atom%D 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株 單核細(xì)胞型瘤細(xì)胞,THP 1細(xì)胞 FaDu(人咽鱗癌細(xì)胞)2-本并噻唑shēng huà shì jì容量:5克
野生型人c-kit受體細(xì)胞株;A7d3-叔丁基-4-羌基茴香迷 3-tqrt-Butyl-4-xy7noxycnisolq 11-00-6
SERPINA7 Others Mouse 小鼠 SerpinA7 / TBG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2,3-二基奈shēng huà shì jì容量:100克
大鼠纖維母細(xì)胞;1/EJ 1-1metxylpalmitate軟脂酸100克2.5N,99.5%
MERTK Others Human 人 MERTK / Mer (aa 578-872) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 142-28-91,3-二錄1,3-Dichloropropane;Trimetxylene
dichloride
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