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產(chǎn)品資料

牛呼腸孤病毒(BRV)試劑盒熒光-PCR法

牛呼腸孤病毒(BRV)試劑盒熒光-PCR法
  • 如果您對該產(chǎn)品感興趣的話,可以
  • 產(chǎn)品名稱:牛呼腸孤病毒(BRV)試劑盒熒光-PCR法
  • 產(chǎn)品型號:XG-R63942
  • 產(chǎn)品展商:西格
  • 產(chǎn)品文檔:無相關(guān)文檔
簡單介紹
牛呼腸孤病毒(BRV)試劑盒熒光-PCR法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品描述

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)

產(chǎn)品名稱

牛呼腸孤病毒(BRV)試劑盒熒光-PCR

規(guī)格

50T

貨號

XG-R63942

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
大鼠腸巨噬細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLAG490,AG-490質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRAG 490(Tyrphostin B42)

R 1610倉鼠肺細(xì)胞 R 1610 hamster lung cells DMEM+10%FBS靈芝酸F(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ganoderic acid F

FGF10 Protein Human 重組人 FGF10 蛋白熊去氧膽酸(UDCA)標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ursodeoxycholic acid

Chang liver (CCL13) (人張氏肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞HCMEC熊去氧膽酸(UDCA)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRUrsodeoxycholic acid

直腸癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)/1ml水飛薊素質(zhì)量規(guī)格:水飛薊素UV 80%;雙賓30%Silymarin
綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFPN-甲基-D-天門冬氨酸N-Methyl-d-Aspartic Acid質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA 腹水瘤細(xì)胞,SAC-IIB2細(xì)胞 VMR106細(xì)胞,大鼠骨肉瘤細(xì)胞D-四氫藥根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)(R)-(+)-Corypalmine質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人胚肺二倍體細(xì)胞;2BSD-醇(標(biāo)準(zhǔn)品)D-Pinitol質(zhì)量規(guī)格:95%,標(biāo)準(zhǔn)品

CLEC4A Others Human DCIR / CLEC4A / CLECSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 果菊苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Echinacoside質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

破骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)蘿酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Usnic acid質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品
MDA-MB-453(
人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2Ursolicacid3-羥基-(3β)-烏索12-1-28-5BR85%

Promocell C-22162 Smooth Muscle Cell GrowthMedium 2 KIT, 平滑肌細(xì)胞生長培養(yǎng)基2型套裝 500ml3--2-本并噻坐啉同 3-MqTHYL-2-BqNZOTHIcZOLINONq HYDRcZONq xy7noCHLORIDq 4338-98-1

人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HCPECLToluidinepule胺蘭100毫克BR,98%

RSPO3 Others Human RSPO3 / R-spondin 3 (aa 1-146) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Indium100毫升AR,98.5%

CatL1 家貓肺成纖維樣細(xì)胞111-87-5正辛醇1-Octanol reagentplus
CM-M088
小鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL乙二酸鍶,英文名或英文縮寫:Strontium oxalate,級別:CP,69%,規(guī)格:250毫升

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株 小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,LIEP-P細(xì)胞 DT40(雞瘤細(xì)胞)7-氧基-2-四輕同 7-Mqthoxy-2-tqtrclonq 4133-34-0

小鼠腦瘤細(xì)胞;BC3H1(-)-薄荷醇,英文名或英文縮寫:Menthol,級別:CP,70%,規(guī)格:25

CTLA4 Others Human CTLA4 / CD152 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-脫氧尿苷-5-三嶙酸四鈉鹽5

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B);P19-CAG-tTA-1D3(15-30)(多聚-L-賴酸)
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
牛呼腸孤病毒(BRV)試劑盒熒光-PCR設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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