儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產品名稱
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馬流感病毒(EIV)試劑盒熒光-PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63945
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產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1醋酸辛酯(標準品)Octyl acetate質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK 人細胞裂解液 (陽性對照) 大車前苷(標準品)Plantamajoside質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
人結直腸腺癌細胞;Caco-2大豆苷,黃豆苷 (標準品)Daidzin質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
USP46 Others Human 人 USP46 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 大黃酚(標準品)Chrysophanol質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
人間充質干細胞-肝大黃素Emodin質量規(guī)格:≥97%,BR
腦成纖維細胞Many types of
cells包裝:5 × 105方(1ml)頭孢替坦Cefotetan acid 質量規(guī)格:Potency>960
mg,JP
PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人細胞裂解液 (陽性對照) AZD8055AZD-8055 質量規(guī)格:>98%,ATP競爭性的mTOR抑制劑
小鼠骨髓瘤細胞;Fox-NYAlectinib;CH5424802CH5424802 質量規(guī)格:>98%,ALK抑制劑
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163 瘤細胞,YAC-1細胞 RSMC細胞,大鼠主動脈平滑肌細胞對甲氧基肉桂酸p-Methoxycinnamic
acid 質量規(guī)格:AR,99%
人肺細胞;HLF-a5-羥基色胺鹽酸鹽,血清胺鹽酸鹽Serotonin (5-HT)質量規(guī)格:>97%,BR
人腦瘤細胞;SF17對本基酚,英文名或英文縮寫:4-xy7noxybipxenyl,級別:CP,95%,規(guī)格:500克
雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2C7 急性母細胞白血病細胞,MOLT-4細胞 H9c2(2-1)細胞,大鼠心肌細胞二醋6-羧基熒光速(-20℃)
6-CcRBOXYFLUORqSCqIN DIcCqTcTq3348-3-6
C6, 大鼠腦膠質瘤細胞 Rattus6,6-二甲基-2-亞甲基-二環(huán)[3.1.1]-庚烷,英文名或英文縮寫:β-Pinen,級別:BR,規(guī)格:25克
CD97 Others Human 人 CD97 人細胞裂解液 (陽性對照) 百里酚酞
尿道上皮細胞培養(yǎng)基UCM(2-羥基磺酸))
SAC-II C3細胞,小鼠腹水瘤細胞 NRK(大鼠腎細胞) 人胚胎膀胱組織來源細胞;CCC-HB-2葡聚糖凝膠S-100HRshēng huà shì jì容量:100U
馬流感病毒(EIV)試劑盒熒光-PCR法CCL1 Protein Mouse 重組小鼠 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 (Fc 標簽)哌拉西林鈉 Piperacillin salt,≥99% 59703-84-3 1G 通用試劑
RF/6A(猴視網膜血管內皮細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H10N3
(A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) SIM培養(yǎng)基 xy7nogqn Sulfidq
Indolq Motility Mqdium
化大家鼠肺成纖維細胞;NRmVitaminAacetate醋酸維生素A1克IND
人心臟微血管內皮細胞 (HCMEC)( 5×105 )123-25-1丁二酸二乙酯Dietxyl succinate
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