產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
產(chǎn)品名稱
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幽門螺旋桿菌(HP)試劑盒熒光-PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R64006
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
74805-90-6甲基麥冬高黃酮A品牌 methylophiopogononeA 組織1酸二酯酶5(PDE5)活性酶連續(xù)循環(huán)定1比色法定量檢測試劑盒20
7437-55-08-香葉草氧基補骨脂素廠家 8-Geranyloxypsoralen 組織1酸二酯酶4(PDE4)活性熒光定量檢測試劑盒10
7437-54-9甲基辛弗林鹽酸鹽廠家 4-hydroxyephedrine 組織1酸二酯酶4(PDE4)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試劑盒20
7432-28-2五味子醇甲品牌 Schisandrin 組織1酸二酯酶3(PDE3)活性熒光定量檢測試劑盒10
74285-86-2雷酚內(nèi)酯說明書 Triptophenolide 組織1酸二酯酶3(PDE3)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試劑盒10
犬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒 Dog thrombomodulin,TM
ELISA Kit 13241-28-6大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷說明書 Chrysophal 8-O-glucoside
英文名稱MouseAILELISAKIT小鼠(AIL)規(guī)格:96T/48T 113443-70-2大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷品牌 Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside
腸侵襲性大腸桿菌(EeroinvasiveE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20 514-47-6大戟二烯醇規(guī)格 Euphol
RatGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISA試劑盒大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 28978-02-1大薊苷廠家 Pectolinarin
小鼠足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒 ,英文名: PCX ELISA Kit 539-15-1大麥芽堿說明書 Hordenine
RatIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISA試劑盒大鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1617-53-4穗花杉雙黃酮品牌 Amentoflavone
小鼠吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO1)ELISA試劑盒 ,英文名: IDO1 ELISA Kit 572-31-6黃杞苷規(guī)格 Engeletin
小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA檢測試劑盒MouseiactParathormone,i-PTHELISAKit
96T/48T 57420-46-98-O-乙酰山梔苷甲酯廠家 8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester
人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)試劑盒 Human tuberculosis aibody
IgG,TB-Ab IgG ELISA Kit 64421-28-9山梔苷甲酯說明書 Shanzhiside methylester
Ratai-gonadoopin-releasinghormonereceptoraibody,GHR-AbELISAKit大鼠促性腺釋放受體抗體(GHR-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 27741-01-1京尼平苷酸品牌 Geniposidic acid
HCT 116(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0401NCI-H446(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-RAPIDWESTERNBLOTTINGKIT-RABBIT-WT快速Western Blotting試劑盒-兔(濕轉(zhuǎn))FROZENsigma
活/死細(xì)胞染色試劑盒CSK1,2-炳二醇二醋酯 1,2-Propylqnqglycol
diccqtctq 63-84-7
GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 基鈷安速(-20℃) Mqcobclcmin 134-22-4
人類原巨核細(xì)胞型白血病細(xì)胞;UT-7天青B,英文名或英文縮寫:Azure B,級別:高,90%,規(guī)格:25克
HHCC細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 小鼠肺癌細(xì)胞,Lewis細(xì)胞 牦牛皮膚細(xì)胞;BMU-S1344-25-2D-脯酸D-Proline;(R)-Pyrrolidine-2-carboxylic
acid;(R)-(+)-Proline;D-Pro
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
幽門螺旋桿菌(HP)試劑盒熒光-PCR法將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。