PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

51014-29-0異去氫鉤藤堿品牌  Isocorynoxeine  植物源性食品芥麥(Buckwheat)試劑盒20

50-99-7D-無水葡萄糖說明書  D(+)-Glucose   植物玉米素核苷(ZR)ELISA檢測試劑盒Plazeatiiboside,ZRELISAKit 96T/48T

509-18-2硬飛燕草堿規(guī)格  Belsoline  植物吲哚乙酸(IAA)ELISA檢測試劑盒PlaIndole-3-aceticacid,IAAELISAKit 96T/48T

509-15-9鉤吻堿說明書  Gelsemine   植物乙酰輔酶A羧化酶(ACETYL-COACARBOXYLASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

509-15-9鉤吻堿規(guī)格  Gelsemine    植物乙酰輔酶A膽乙酰轉移酶(ACAT)活性熒光定量檢測試劑盒20
犬葉酸(FA)ELISA檢測試劑盒CanineFolicacid,FAELISAKit 96T/48T  20316-62-5密蒙花苷廠家  Tiliroside

犬腎素(Renin)試劑盒 Canine Renin ELISA Kit  38226-84-5綿馬酸ABA說明書  Filixic acid ABA

英文名稱HumanPCNAELISAKit人增殖細胞抗原(PCNA)規(guī)格：96T/48T  25406-64-8莫諾苷品牌  Morroniside

陳舊血紅細胞溶解液500毫升  木蝴蝶苷A規(guī)格  Oroxin A; Baicalin-7-glucoside

Ratheatshockprotein70,hSP-70ELISA試劑盒大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  114482-86-9木蝴蝶苷B廠家  Oroxin B; Baicalin-7-diglucoside
犬維生素K1(VK1)試劑盒 Canine Vitamin K1,VK1 ELISA Kit  39012-20-9胡黃連苷II說明書  Picroside II

英文名稱HumanansformingGrowthfactorβ1ELISAkit人轉化生長因子β1(TGFβ1)規(guī)格：96T/48T  64461-95-6胡黃連苷III品牌  Picroside III

超氧化物歧化酶(SOD)紅細胞裂解樣品制備試劑盒50  94-62-2胡椒堿規(guī)格  Piperine

RatGonadoopin-releasinghormonereceptor,GHRELISA試劑盒大鼠促性腺釋放受體(GHR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  38226-86-7脫水羊藿素廠家  Anhydroicaritin

小鼠轉化生長因子β3(TGF-β3)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-β3 ELISA Kit  474-58-8胡蘿卜苷說明書  Daucosterol
EB病毒轉化的人B細胞;HH-16 人腦靜脈血管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mLCASEIN酪蛋白500G9000-71-9COLD

大鼠成纖維細胞RLF(S)-1-本基丁安 98+% (S)-1-Phqnylbutylcminq 3789-60-4

NP Others SARS SARS 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 細胞溶解酶(2-8℃) LYTICcSq 37340-27-1

團頭魴尾鰭細胞;WCF偏硼酸，英文名或英文縮寫：Lead(II)borate，級別：AR，98.5%，規(guī)格：10克

大鼠肺泡巨噬細胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1] 肝癌細胞，QGY-7703細胞 ST2/o細胞，小鼠雜交瘤細胞110-70-3N,N`-二甲基基N,N'-Dimetxyl-1,2-ethanediamine
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
乳酸桿菌(LB)試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。