產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
產(chǎn)品名稱
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肉毒桿菌A型(CB-A)試劑盒熒光-PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R64018
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
6882-68-4槐定堿品牌 Sophoridine 組蛋白H4-K12乙酰化檢測試劑盒10/20等
6873-13-8黃柏堿規(guī)格 Phellodendrine 組蛋白H3乙?;瘷z測試劑盒10/20等
68406-26-8人參皂苷Rb3說明書 Ginsenoside Rb3 組蛋白H3-T451酸化檢測試劑盒10/20等
6817-41-0異蓮心堿廠家 Isoliensinine 組蛋白H3-T31酸化檢測試劑盒10/20等
6812-81-3櫟癭酸規(guī)格 Roburic acid 組蛋白H3-T111酸化檢測試劑盒10/20等
犬轉(zhuǎn)移生長因子β1(TGF-β1)ELISA檢測試劑盒Canineansforminggrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit
96T/48T 92-61-5東莨菪內(nèi)酯廠家 Scopoletin
犬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)試劑盒 Dog Angiotensin-conveing
enzyme 2,ACE2 ELISA kit 28957-04-2冬凌草甲素說明書 Oridonin
英文名稱FDP纖維蛋白降解產(chǎn)物規(guī)格:96T/48T
52617-37-5冬凌草乙素品牌 ponicidin
腸致病性大腸桿菌(EeropathogenicE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20 490-67-5冬綠苷規(guī)格 Gaultherin
Ratglialcellline-derivedneuroophicfactor,GDNFELISA試劑盒大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 80154-34-3豆腐果苷廠家 Helicid
冰凍切片組織線粒體復(fù)合物I蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 482-83-7黃檀素說明書 6-Hydroxy-7-methoxy-4-phenylcoumarin
RatFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISA試劑盒大鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 19057-67-1薯蕷苷A品牌 Progenin III
小鼠左右決定因子1(LEFTY1)ELISA試劑盒 ,英文名: LEFTY1 ELISA Kit 54522-53-1甲基原纖細薯蕷皂苷規(guī)格 Methyl protogracillin
鴨白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒DuckIerleukin-4,IL-4ELISAKIT
96T/48T 637349-03-2偽原纖細薯蕷皂苷廠家 Pseudoprotogracillin
犬游離脂肪酸(FFA)試劑盒 Dog free fatty acids,FFA
ELISA kit 54848-30-5原纖細薯蕷皂苷說明書 Protogracillin(p)
SEMA4D Others Rat 大鼠 Semaphorin 4D /
SEMA4D / CD100 人細胞裂解液 (陽性對照) L-精酸乙酯鹽酸鹽,英文名或英文縮寫:L-Arginine etxyl ester dixy7nochloride,級別:BR,98.5%,規(guī)格:5克
人肺動脈成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL1,2:5,6-二-o-環(huán)亞己基-d-甘露醇 1,2:5,6-DI-O-CYCLOHqXYLIDqNq-D-McNNITOL 76779-67-4
M肉毒桿菌A型(CB-A)試劑盒熒光-PCR法619細胞,人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細胞 產(chǎn)氣莢膜梭菌 人T細胞白血病細胞;HuT 78鉬醋 Molybdic ccid 778-91-4
ANGPTL4 Protein Human 重組人 ANGPTL4 蛋白 (His 標簽)月桂基基錄化,英文名或英文縮寫:DTAC,級別:高,60%,規(guī)格:25克
KU812(人外周血嗜堿性白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 狗 IL11RA / IL-11RA
/ IL11Rα 人細胞裂解液 (陽性對照) EE肉湯NA
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。