PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

家貓皮膚細胞;FCA-S1 胚肺成纖維細胞，HFL-I細胞 IEC-6細胞，大鼠小腸隱窩上皮細胞檸檬酸三丙酯(>97.0%(T))質量規(guī)格：>97.0%(T)Tripropyl

人正常肺上皮細胞;BEAS-2BN-丁基苯磺酰胺(>98.0%(HPLC)(N))質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)N-Butylbenzenesulfonamide

CD200R1L Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200RLa 人細胞裂解液 (陽性對照) D-(+)-樟腦(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)(+)-Camphor

原代成纖維細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml阿卡波糖十三醋酸酯質量規(guī)格：美國進口Acarbose Tridecaacetate

CD38 Others Rabbit 兔 SCARB3 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬苦素，黃柏內酯(橙皮提取) 質量規(guī)格：HPLC≥98%,橙皮提取Limonin
人APP-PS1雙基因轉染CHO細胞株;7WPS1雙去氧基姜黃素(標準品)Bisdemethoxycurcumin質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

TNFRSF9 Others Mouse 小鼠 4-1BB / TNFRSF9 / CD137 人細胞裂解液 (陽性對照) L-山梨糖(標準品)L-(-)-Sorbose質量規(guī)格：分析標準品

KP-N-NS 人腎上腺神經母細胞瘤(腦轉移)糖精鈉 水合物(標準品)Saccharin  salt hydrate質量規(guī)格：分析標準品

SiHa人頸鱗癌細胞 SiHa human uterine cervical squamous cell carcinoma MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS標準溶液(0.05000mol/L(0.1N))Iodine solution質量規(guī)格：0.05000mol/L(0.1N)

SHH Protein Mouse 重組小鼠 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (His 標簽)標準溶液(1000μg/ml,溶劑：水)Iodine solution質量規(guī)格：1000μg/ml,溶劑：水
TF-1(人血液白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腦瘤細胞;BC3H1CHAPSO3-[(3-膽胺基)二甲基基]-2-羥基-1-磺酸內鹽25克ACS

人間充質干細胞-肝臟裂解物HMSC-hp L沒食子酸一水物 Gallic acid,≥98.0% 99-24-1 25G 通用試劑

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 肝速內;肝速;肝鱗脂 Hqpcrin wo7ium sclt;Hqpscl;Lipohqpin;LiquqMin;Lipohqpinqttq;Longhqpcrin;Monopcrin;Pcnhqprin;Pulcrin9041-8-1

正常小鼠Leydig細胞;TM3選擇性巧克力平板1米

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL13494-80-9碲塊Tellurium
6537-80-0菊苣酸品牌  Cichoric Acid   組蛋白H3-K18(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等

65-19-0鹽酸育亨賓品牌   Yohimbine   組蛋白H3-K14乙?；瘷z測試劑盒10/20等

64-86-8秋水仙堿說明書    Colchicine  組蛋白H3-K122(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等

64849-39-4甜葉懸鉤子苷說明書  Rubusoside  組蛋白H2B-K5乙?；瘷z測試劑盒10/20等

64849-39-4甜茶苷說明書  Rubusoside   組蛋白H2B-K46乙酰化檢測試劑盒10/20等
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
肉毒桿菌F型（CB/F）試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。