原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
產(chǎn)品名稱:登革熱病毒4型(DFV-IV)試劑盒熒光-PCR法
產(chǎn)品貨號(hào):XG-R64074
規(guī)格:50T
分類:熒光-PCR法
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、熒光、ELISA
6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成完全同步。
應(yīng)用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測(cè)樣品需要做三次重復(fù),下表只列出一次。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后*后加)
小香豬皮膚細(xì)胞;SSC-S2 組織細(xì)胞瘤細(xì)胞,U-937細(xì)胞 NUTU-19細(xì)胞,大鼠卵巢癌細(xì)胞株2-溴-4'-苯基乙酰苯(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)2-Bromo-4'-phenylacetophenone
SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞;hFOB 1.19丹磺酰氯(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)Dabsyl
Chloride
HA Others H1N3 甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1
(Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) O-4-硝基芐基羥胺鹽酸鹽(>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記)質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記O-4-Nitrobenzylhydroxylamine
CL-0152MDA-MB-453(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×27-乙酰氧基-4-溴甲基(>98.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記7-Acetoxy-4-bromomethylcoumarin
F10 Others Human 人 Coagulation Factor X / FX / F10 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 1-萘乙醇(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR1-Naphthalene
ethanol
人角膜上皮細(xì)胞裂解物HCEpiCL促腎上腺皮質(zhì)(1-10),人ACTH (1-10),
human質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
CCL6 Others Mouse 小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 促腎上腺皮質(zhì)(1-13),人ACTH (1-13),
human質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
BEAS-2B 人支氣管上皮細(xì)胞促腎上腺皮質(zhì)(1-16),人ACTH (1-16),
human質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
CL-0166NCI-H1650(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2促腎上腺皮質(zhì)(1-17),人ACTH (1-17),
human質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
MM, 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞促腎上腺皮質(zhì)(1-24), 人ACTH (1-24), human質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
HL-7702(人肝正常細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2L-ISOLEUCINEL-異亮酸美國藥典級(jí)25G73-32-5RT
BACE1 Others Human 人 BACE1 / ASP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2-二本基鱗-2 -(N,N-二安基)聯(lián)本 97%
2-Diphqnylphosphino-2'-(N,N-dimqthylcmino)biphqnyl 40417-00-9
人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-懸浮生長(zhǎng)HOPC-osRAFFINOSEPENTAHYDRATE綿子糖,五水超級(jí)500G17629-30-0RT
CAMKV Others Human 人 CAMKV 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 半乳糖氧化酶100克
家貓肺細(xì)胞;FCA-L2930-36-91-甲基吡唑 97+%1-metxylpyrazole
57-87-4甾醇廠家 Ergosterol 豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒 Porcine IGFBP-3
ELISA Kit
578-74-5芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷品牌 Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside 豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit
96T/48T
57817-89-7甜菊苷廠家 Stevioside 豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)試劑盒 Pig insulin-like
growth factors binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit
574-84-5秦皮素廠家 Fraxetin 豬胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)試劑盒 Porcine
insulin-like growth factors 2,IGF-2 ELISA Kit
57420-46-9胡麻屬苷品牌 Sesamoside 豬胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineinsulin-likegrowthfactors2,IGF-2ELISAKit
96T/48T
PCR服務(wù):
登革熱病毒4型(DFV-IV)試劑盒熒光-PCR法公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。
(03)請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
(04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。
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