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產(chǎn)品資料

鹿源性成分(Deer)試劑盒熒光-PCR法

鹿源性成分(Deer)試劑盒熒光-PCR法
  • 如果您對(duì)該產(chǎn)品感興趣的話,可以
  • 產(chǎn)品名稱:鹿源性成分(Deer)試劑盒熒光-PCR法
  • 產(chǎn)品型號(hào):XG-R64086
  • 產(chǎn)品展商:西格
  • 產(chǎn)品文檔:無相關(guān)文檔
簡單介紹
鹿源性成分(Deer)試劑盒熒光-PCR法保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品描述

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號(hào)強(qiáng)

產(chǎn)品名稱

鹿源性成分(Deer)試劑盒熒光-PCR

規(guī)格

50T

貨號(hào)

XG-R64086

儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
19885-10-0澤瀉醇A說明書  Alisol A   英文名稱RatneuropeptideYELISAKit大鼠神經(jīng)肽Y(NPY)規(guī)格:96T/48T

19879-32-4補(bǔ)骨脂甲素說明書  Bavachin   英文名稱RatneuropeptideYELISAKit大鼠神經(jīng)肽Y(NPY)規(guī)格:96T/48T

19773-24-1貝母辛規(guī)格  Peimisine  英文名稱RatMyosinELISAKit大鼠肌球蛋白(Myosin)規(guī)格:96T/48T

19666-76-3人參二醇說明書  Panaxadiol  英文名稱RatMyosinELISAKit大鼠肌球蛋白(Myosin)規(guī)格:96T/48T

19573-01-4白當(dāng)歸素規(guī)格  Byakangelicin   英文名稱RatMyoglobinELISAKit大鼠肌紅蛋白(MYO)規(guī)格:96T/48T
人精脒/精胺N(1)-乙酰轉(zhuǎn)移酶樣蛋白1(SATL1)試劑盒 Human SATL1 ELISA Kit  18842-98-3雞屎藤苷酸說明書  paederosidic acid

RatAngiogenin,ANGELISAKit大鼠血管生長素(ANG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  20547-45-9雞屎藤苷品牌  paederoside

載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  80418-25-3三七皂苷R2(S)規(guī)格  20(S)-NotoginsenosideR2

mouseadrencocoicoopichormone,ACTHELISA試劑盒小鼠促腎上腺皮質(zhì)(ACTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  52012-29-0異夏佛塔苷廠家  Isoshaftoside

小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒 ,英文名: Apo-H ELISA Kit  313-67-7馬兜鈴酸A說明書  Aristolochic Acid A
小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)ELISA試劑盒 ,英文名: TFR2 ELISA Kit  24211-30-1杜鵑素說明書  Farrerol

犬肝素輔因子Ⅱ(HC)ELISA檢測(cè)試劑盒Canineheparincofactor,HCELISAKit 96T/48T  87480-46-4短葶山麥冬皂苷C品牌  Liriope muscari baily saponins C

犬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)試劑盒 Dog angiotensin I conveing enzyme(peptidyl-dipeptidase A)1(ACE)ELISA kit  501-98-4對(duì)香豆酸規(guī)格  p-Coumaric acid

英文名稱HA透明質(zhì)酸規(guī)格:96T/48T  114977-28-5多烯紫杉醇廠家  Docetaxel,DOC

超白金TAGDNA聚合酶200U  4871-97-0莪術(shù)醇說明書  Curcumol
3681-93-4
牡荊素規(guī)格  Vitexin   載玻片細(xì)胞MYC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

366814-42-8苦蘇花皂苷C規(guī)格  Cussosaponin C   載玻片細(xì)胞MAPK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

3650--09-7鼠尾草酸規(guī)格  Carnosic acid  載玻片細(xì)胞JNK/SAPK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

364779-15-7人參皂苷Rk3說明書  Ginsenoside Rk3  載玻片細(xì)胞IP3R受體蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

36284-77-2常春藤皂苷B品牌  Hederasaponin B   載玻片細(xì)胞INSULIN蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
鹿源性成分(Deer)試劑盒熒光-PCR將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

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