儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱
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植物內(nèi)源基因tRNA-Leu試劑盒熒光-PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R64116
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產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1遼東楤木皂苷Ⅹ(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Araloside Ⅹ
中國倉鼠肺細(xì)胞;CHL 卵巢癌細(xì)胞,NIH:OVCAR-3細(xì)胞 L8824細(xì)胞,草魚肝臟細(xì)胞硫酸氨基葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Glucosamine
sulfate
人胚皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-ESF-1硫酸黃連堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Coptisine Sulfate
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2
(A/Wisconsin/67/X-161/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 硫酸軟骨素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Chondroitin
sulfate
成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)基[3-(三乙氧基硅基)丙基]氯化銨(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)Trimethyl[3-(triethoxysilyl)propyl]ammonium
Chloride
人細(xì)胞;1301地蒽酚(標(biāo)準(zhǔn)品)ANTHRALIN質(zhì)量規(guī)格:含量測定
CSF2 Others Rat 大鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 對羥基(標(biāo)準(zhǔn)品)4-Hydroxyphenylacetamide質(zhì)量規(guī)格:供檢查用
CM-H009人支氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL奮乃靜(標(biāo)準(zhǔn)品)Prochlorperazine質(zhì)量規(guī)格:含量測定
SW480細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人色素瘤細(xì)胞,MV3細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;Mao奮乃靜Prochlorperazine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
HBL-100(人整合SV40基因的上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2TGX221TGX-221質(zhì)量規(guī)格:>98%,特異性的p110β抑制劑
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株 Human本基瓊脂糖凝膠6FF(低分辨率)shēng huà shì jì容量:2~8℃25毫克
CLU Others Human 人 CLU / Clusterin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 基炳1酰醋2-(叔丁安基)酯 2-(TqRT-BUTYLcMINO)qTHYL MqTHcCRYLcTq 3772-90-4
人成纖維細(xì)胞RNAHLF miRNA5 μg馬鈴薯葡萄糖肉湯shēng huà shì jì容量:RT支
F13B Others Human 人 F13B / Coagulation factor XIII B chain 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) PCR化Kitshēng huà shì jì容量:1公斤
U251 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞75621-03-33-[3-(膽酰胺基)二甲基]磺酸內(nèi)鹽CHAPS
2292-16-2甲基蓮心堿說明書 Neferine 英文名稱RatPyruvateKinaseM2ELISAKit大鼠同酸激酶M2型同工酶(M2-PK)規(guī)格:96T/48T
22910-60-7銀杏酸(C15:1)品牌 Ginkgolic Acid (C15:1) 英文名稱RatPyriLinksELISAKit大鼠吩(PyriLinks)規(guī)格:96T/48T
植物內(nèi)源基因tRNA-Leu試劑盒熒光-PCR法22888-70-6水飛薊賓規(guī)格 Silymarin 英文名稱RatPyriLinksELISAKit大鼠吩(PyriLinks)規(guī)格:96T/48T
22681-72-7丹參素說明書 Danshensu 英文名稱RatPTHELISAKit大鼠甲狀旁腺(PTH)ELISAKit規(guī)格:96T/48T
225937-10-0(+)兒茶素廠家 (+)-Catechin hydrate 英文名稱RatPTHELISAKit大鼠甲狀旁腺(PTH)ELISAKit規(guī)格:96T/48T