儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱
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馬動脈炎病毒(EAV)定性試劑盒 RT-PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R64233
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產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復孔間差異小,實驗結(jié)果重復性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
人間充質(zhì)干細胞-肝臟裂解物HMSC-hp L超細高嶺土(6000(3.5um))Kaolin(superfine)質(zhì)量規(guī)格:6000(3.5um)
AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 高嶺土(醫(yī)藥級)Kaolin質(zhì)量規(guī)格:醫(yī)藥級
正常小鼠Leydig細胞;TM3硅藻土G(TLC)Kieselguhr G質(zhì)量規(guī)格:TLC
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硅膠(AR)Silica gel質(zhì)量規(guī)格:AR
EC109,人食管癌細胞 Human二氧化硅(99.99%,1-3mm)Silicon
dioxide質(zhì)量規(guī)格:99.99%,1-3mm
小鼠正常肝細胞;NCTC 1469
[NCTC1469]蛋白激酶C(19-31)Protein Kinase C (19-31)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
MDA-MB-453細胞,癌細胞 人食管鱗癌,KYSE 450細胞 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-beta2(414)
CL.32 pTGF-beta2(414)PLX4720PLX-4720質(zhì)量規(guī)格:>98%,B-RafV600E抑制劑
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2N,N-羰基二咪唑1,1'-Carbonyldiimidazole質(zhì)量規(guī)格:>98%
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Brisbane/59/2007) 血凝素HA1
(Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) LY2835219LY2835219質(zhì)量規(guī)格:>98%,CDK4 和CDK6選擇性抑制劑
人成纖維細胞HMFLEE011LEE011質(zhì)量規(guī)格:>98%,高度特異性CDK4/6抑制劑
人肺細胞;HLF-aL-pxenYLALANINEL-本美國藥典級白色粉末RTsigma
BCHE Others Mouse 小鼠 BCHE / CHE1 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-肖基本;間肖基;間肖基本 3-nitnotoluqnq;Mqthyl-M-nitnobqnzol;M-Ni-trotoluol1999-8-1
腦成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)D-木糖測試盒1000支/包RT
FCGR2A Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32a / FCGR2A 人細胞裂解液 (陽性對照)
wo7iumxy7noXIDE,10NSOLUTION,10N超級100MLRT
SRA01/04 人晶體上皮細胞硅油 INA
豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
S-2-Benzothiazolyl2-amino-alpha-(methoxyimino)-4-thiazolethiolacetate 中文名:AE活性酯 分子式:C13H10N4O2S3 度:98.0%
豬游離脂肪酸 英文名稱: Porcine free Fatty Acid 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: FFA
Stauntosaponin A
1417887-91-2 中文名: 分子式:C28H38O7 度:97.0% 關鍵詞:
豬乙型腦炎病毒抗體IgGELISA試劑盒 48T/96T 試劑盒 組裝/原裝
S-2-Benzothiazolyl2-amino-alpha-(methoxyimino)-4-thiazolethiolacetate 中文名:AE活性酯 分子式:C13H10N4O2S3
豬乙型腦炎病毒elisa試劑盒 豬乙型腦炎病毒試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 豬乙型腦炎病毒試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:豬乙型腦炎病毒試劑盒、豬乙型腦炎病毒eisa試劑盒 馬動脈炎病毒(EAV)定性試劑盒 RT-PCR法 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Salvisyrianone 中文名: 分子式:C20H24O3 度:95.0%
豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
Rubioncolin C 132242-52-5 中文名: 分子式:C27H22O6 度:98.0% 關鍵詞:
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