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產(chǎn)品名稱：輔酶ⅠNAD(H)比色法檢測試劑盒100管/48樣
規(guī)格 : 50管/24樣
測試方法:可見分光光度法
商品介紹：
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測定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要氫受體，**的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導(dǎo)、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
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特點：
1、優(yōu)化設(shè)計的實驗方案，1小時即可完成
2、靈敏度高，操作便捷
3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑
常見樣本處理方法：
1、血清（漿）樣品：直接檢測。
2、細胞或組織樣品的制備： 培養(yǎng)細胞：先收集細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細胞數(shù)量
（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議 500萬細胞加入 1mL提取液） ，超聲波破碎細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲 3s，間隔10s，重復(fù)30 次）8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，
加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
實驗通用規(guī)則：
1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。
4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。
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測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
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