培養(yǎng)方法：
收到后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：
如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細胞已長滿（達80-90%）。即可進行傳代，具體步驟如下：
a，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次。
b，向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細胞。
c，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)
d，傳代比例：1:2-1:3

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線。

7-Oxo-β-sitosterol  2034-74-4  中文名：7-氧代-β-谷甾醇  分子式：C29H48O2    Rat vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)ELISA試劑盒

Schleicheol 2  256445-68-8  中文名：  分子式：C30H52O2    Humansalivaryductaoaibody,SDAELISAKit 人抗唾液腺導管組織抗體(SDA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Ikshusterol 3-O-glucoside  112137-81-2  中文名：  分子式：C35H60O7    Humancytokeratin18,CK-18ELISA試劑盒人細胞角蛋白18(CK-18)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Cerevisterol  516-37-0  中文名：啤酒甾醇  分子式：C28H46O3    組織HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

3β,5α-Dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  14858-07-2  中文名：  分子式：C28H44O3    Humanplatelet-associatedCompleme3,PAC3ELISAKit人血小板相關補體3(PAC3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Phorate-sulfone D10 標準品 2-Nitronaphthalene - 純品型，10mg

酸性紅92 標準品 2,3,5-Trimethylphenol 18472-87-2 純品型，0.1G

Phenytoin標準品 Phenytoin - 純品型，250MG
1-氯萘 標準品 1H,1H,2H,2H-Perfluorodecylacrylate 90-13-1 純品型，100mg

2,3-二氯萘 標準品 1H,1H,2H,2H-Perfluoro-1-decanol 2050-75-1 純品型，10mg

1,5-二氯萘 標準品 1H,1H,2H,2H-Perfluorododecylacrylate 1825-30-5 純品型，25mg
5'-Amino-Modifier C6, TFA-protected1gAcetylatractylodinol615829乙酰蒼術素醇

6-Aminohexanol25gAtractylodin5523蒼術素

PFP聚合物0 μLCrenulatin6262大花紅天素

Sybr Green I （效果同SYBR Green I）核酸染料（× DMSO溶液）（PCR級）0 uL1-Monopalmitin54241-棕櫚酸單甘油酯

RTGreen（效果同EvaGreen）核酸染料（× 水溶液）0 μLMenisdaurin677658
小鼠雪旺細胞公司來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務。我司擁有專業(yè)的實驗室，可無菌操作并提供相關科研項目解決方案以及實驗服務。本產(chǎn)品僅能用于科研

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