實驗要點:
1.產(chǎn)品名稱如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質(zhì)在反應前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應后,應充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。
應用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等實驗,質(zhì)量保證,無效免費退換,另外本公司長期供應化抗體、WB抗體、化試劑盒和抗體試驗所需全部相關試劑、熒光標記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實驗抗體。
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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Anti-NFIA/NF-1抗體
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0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
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XG-01K85365
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英文名稱 Anti-NFIA/NF-1
中文名稱 核因子1A抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應 Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Sheep
產(chǎn)品類型 一抗
研究領域
蛋白分子量 predicted molecular weight: 56kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human NFIA/NF-1
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
別 名 CCAAT binding transcription factor; CCAAT Box Binding Transcription Factor; CCAAT-box-binding transcription factor; CTF; FLJ39164; NF I/A; NF-I/A; NF1 A; NF1-A; NF1A; NFI A; NFI L; NFI-A; NFIA; NFIA_HUMAN; Nuclear Factor 1 A; Nuclear factor 1 A type; Nuclear factor 1 A-type; Nuclear factor 1/A; Nuclear Factor 1A; Nuclear Factor I A; Nuclear factor I/A; nuclear factor I/X (CCAAT-binding transcription factor); ynuclear factor I/X (CCAAT-binding transcription factor); Nuclear factor I/X; Nuclear Factor IA; TGGCA binding protein; TGGCA-binding protein.
稀釋方法:
方法1. 實驗前,將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋(或PBS稀釋),將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反復凍溶。
方法2. 實驗前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 預試驗可做幾個梯度1:100、200、400背景高還可做上去,選一個好的稀釋比例,再正式做,工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結(jié)論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原 性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原活性,做化 時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細胞結(jié)構(gòu),可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交 的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
抗體的鑒定:產(chǎn)品僅用于科研
1)抗體的效價鑒定:不管是用于診斷還是用于制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯(lián)吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
2)抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力。抗體的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計算交叉反應率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應率近似為0,即該血清的特異性較好。
3)抗體親和力:是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
Beta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)(多肽蛋白) 0.1mg
GTPBP10 英文名稱: GTP結(jié)合蛋白10抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATG4C 自噬相關蛋白4C抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-HIV-1 ENV (gp160) antigen/FITC 熒光素標記艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424) /FITC 熒光素標記0酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人血管**素樣蛋白4(ANGPTL4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 別稱:ARP4, FIAF, HFARP, NL2, PGAR, pp1158, Fasting-Induced Adipose Factor Human ANGPTL4(Angiopoietin Like Protein 4) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組ANGPTL4濃度
Dog IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml
FAM113A 英文名稱: FAM113A蛋白抗體 0.2ml
人基因/bri3結(jié)合蛋白抗體 Anti-HCCR-1 0.1ml
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr674) /FITC 熒光素標記0酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KB1(Ser441+
Anti-NFIA/NF-1抗體呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 20次
細胞總抗氧化能力(TAC)化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 50次
組織總抗氧化能力(TAC)化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 50次
食物總抗氧化能力(TAC)化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 50次
體液總抗氧化能力(TAC)化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 50次
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