實驗要點:
1.產品名稱如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質在反應前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質之間的分子比按蛋白質表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結合位點可能因此被封閉,導致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結合;
7.交聯反應后,應充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結合產生競爭作用;
8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。
應用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等實驗,質量保證,無效免費退換,另外本公司長期供應化抗體、WB抗體、化試劑盒和抗體試驗所需全部相關試劑、熒光標記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實驗抗體。
產品名稱
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規(guī)格
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貨號
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Anti-Nestin抗體
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0.1ml/100μg 0.2ml/200μg 1ml/1mg
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XG-01K85455
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英文名稱 Anti-Nestin
中文名稱 巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg 1ml/1mg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應 Mouse, Rat
產品類型 一抗
研究領域 腫瘤 心血管 發(fā)育生物學 神經生物學 干細胞 細胞類型標志物 腫瘤細胞生物標志物
蛋白分子量 predicted molecular weight: 209kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from rat Nestin
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產品應用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
別 名 ESTM 46; FLJ 21841; FLJ21841; Intermediate filament protein; Nbla00170; Nes; NEST_RAT; Nestin.
稀釋方法:
方法1. 實驗前,將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋(或PBS稀釋),將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反復凍溶。
方法2. 實驗前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 預試驗可做幾個梯度1:100、200、400背景高還可做上去,選一個好的稀釋比例,再正式做,工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原 性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原活性,做化 時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細胞的形態(tài)結構,且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交 的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
抗體的鑒定:產品僅用于科研
1)抗體的效價鑒定:不管是用于診斷還是用于制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
2)抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計算交叉反應率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質的交叉反應率近似為0,即該血清的特異性較好。
3)抗體親和力:是指抗體和抗原結合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結合位點與抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數K表示,K的單位是L/mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
Donkey Anti-Goat IgG/Gold 膠體金標記的驢抗羊IgG 0.5ml
GK2 英文名稱: 甘油激酶2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASB13 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族13抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-HtrA2/Omi/FITC 熒光素標記絲氨酸蛋白酶/線粒體絲氨酸蛋白酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Monkey IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗猴IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-PKC delta (Tyr311)/FITC 熒光素標記0酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人血清淀粉樣蛋白P(SAP)酶聯吸附測定試劑盒 別稱:APCS, HEL-S-92n, PTX2, SAP, amyloid P component Human SAP(Serum Amyloid P Component) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組SAP濃度
Mouse Anti-human IgG 小鼠抗人IgG 1mg
FCAR 英文名稱: 球蛋白A Fc段受體1抗體 0.1ml
鼠抗人A核蛋白單克隆抗體 Mouse Anti-influenza A virus nucleoprotein Monoclonal 0.1ml
Anti-PP-2A/FITC 熒光素標記蛋白質0酸酶-2A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RAD9(Ser380) 0酸化細胞周期檢查控制
Anti-Nestin抗體冰凍切片組織APC蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
石蠟切片組織APC蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
細胞APC蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 10/50 次
細胞APC蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 10/50 次
APC蛋白表達西方雜交分析試劑盒 5次
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