抗體的鑒定:產(chǎn)品僅用于科研
1)抗體的效價(jià)鑒定:不管是用于診斷還是用于制備抗體的目的都是要求較高效價(jià)。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),酶聯(lián)吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。
2)抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時(shí)的濃度,并按公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時(shí),表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
3)抗體親和力:是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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Anti-NKR/Neurokin B receptor抗體
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0.2ml/200μg
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XG-01K85512
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英文名稱 Anti-NKR/Neurokin B receptor
中文名稱 神經(jīng)激肽B受體抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Guinea Pig
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 52kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human NKR N-terminus
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
別 名 Neuromedin K receptor; NK-4 receptor; NKR; Neurokinin B receptor; NK-4R; K1R; Neurokinin 4 R; NK-3R; Tachykinin receptor 3; MGC148060; MGC148061; NK 3 receptor; NK3 receptor; NK3R; TAC 3R; TAC3R; TAC3RL; Tachykinin receptor 3; TACR 3; TACR3; NK3R_HUMAN.
稀釋方法:
方法1. 實(shí)驗(yàn)前,將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋(或PBS稀釋),將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反復(fù)凍溶。
方法2. 實(shí)驗(yàn)前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 預(yù)試驗(yàn)可做幾個(gè)梯度1:100、200、400背景高還可做上去,選一個(gè)好的稀釋比例,再正式做,工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片,可能會(huì)破壞組織的抗原 性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原活性,做化 時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),可能會(huì)使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí),目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交 的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
1.產(chǎn)品名稱如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來篩選適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生物素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會(huì)對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
EAM1104I (EARI) 1,500U (10U/ul) 限制性內(nèi)切酶和克隆酶
EAM1105I (AHDI) 1,000U (10U/ul) 限制性內(nèi)切酶和克隆酶
ECL136II (ECOICRI) 1,500U (10U/ul) 限制性內(nèi)切酶和克隆酶
ECOO109I 2,000U (10U/ul) 限制性內(nèi)切酶和克隆酶
ECORI 5,000U (10U/ul) 限制性內(nèi)切酶和克隆酶
通關(guān)藤苷X HPLC≥98% 20mg 犬白介素10(IL-10)試劑盒 Dog Ierleukin 10,IL-10 ELISA Kit
卡瓦黃素內(nèi)酯B HPLC≥97% 20mg 英文名稱HumanLeptinELISAkit人瘦素(Leptin)規(guī)格:96T/48T
連翹酯苷I HPLC≥98% 5mg 大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達(dá)載體(pGEFP-AM)感受態(tài)菌DH-5α1毫升
連翹酯苷H HPLC≥98% 5mg RatL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISA試劑盒大鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
連翹酯苷F HPLC≥98% 5mg 小鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒 ,英文名: TXB2 ELISA Kit
甲基基苦參醇C HPLC≥98% 5mg 小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(X)ELISA檢測試劑盒MousecrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,XELISAKit 96T/48T
苦參醇X HPLC≥98% 5mg 人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)試劑盒 Human maix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit
苦參醇W HPLC≥98% 5mg RatCaspase3,Casp-3ELISAKit大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
苦參醇N HPLC≥98% 5mg 100微升1厘米光徑塑料比色皿1個(gè)
苦參醇S HPLC≥98% 5mg Mousecarcinoembryonicaign,CEAELISA試劑盒小鼠癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
磺胺索嘧啶 標(biāo)準(zhǔn)品 Toxaphene 515-64-0 純品型,100mg 特征形態(tài) 固態(tài)
甲磺草胺 標(biāo)準(zhǔn)品 n-Octacosane 122836-35-5 純品型,0.1g 特征形態(tài) 固態(tài)
磺胺曲沙唑 標(biāo)準(zhǔn)品 3-Amino-2-oxazolidinoneAOZ - 純品型,50mg 特征形態(tài) 固態(tài)
Anti-NKR/Neurokin B receptor抗體冰凍切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
石蠟切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
載玻片細(xì)胞CASPASE-4蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
冰凍切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
石蠟切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
應(yīng)用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等實(shí)驗(yàn),質(zhì)量保證,無效免費(fèi)退換,另外本公司長期供應(yīng)化抗體、WB抗體、化試劑盒和抗體試驗(yàn)所需全部相關(guān)試劑、熒光標(biāo)記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標(biāo)記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實(shí)驗(yàn)抗體。
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