抗體的鑒定:產(chǎn)品僅用于科研
1)抗體的效價鑒定:不管是用于診斷還是用于制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),酶聯(lián)吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。
2)抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
3)抗體親和力:是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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Anti-phospho-PI3K/PIK3CD(Tyr524)抗體
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0.1ml/100μg
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XG-01K85750
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英文名稱 Anti-phospho-PI3K/PIK3CD(Tyr524)
中文名稱 磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse
產(chǎn)品類型 一抗 磷酸化抗體
研究領(lǐng)域 腫瘤 學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
蛋白分子量 predicted molecular weight: 115kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human PIK3CD around the phosphorylation site of Tyr524
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
別 名 PIK3CD(phospho Y524); PI3 Kinase p110 delta; p110D; p110delta; Phosphatidylinositol 3 kinase catalytic delta polypeptide; Phosphatidylinositol 4 5 bisphosphate 3 kinase catalytic subunit delta isoform; Phosphatidylinositol 45 bisphosphate 3 kinase catalytic subunit delta isoform; Phosphoinositide 3 kinase B; Phosphoinositide 3 kinase C; Phosphoinositide 3 kinase catalytic delta polypeptide; PI3 kinase p110 subunit delta; PI3K; PIK3CD; PK3CD; PtdIns 3 kinase p110; PI 3 Kinase p110 delta.
稀釋方法:
方法1. 實(shí)驗(yàn)前,將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋(或PBS稀釋),將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反復(fù)凍溶。
方法2. 實(shí)驗(yàn)前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 預(yù)試驗(yàn)可做幾個梯度1:100、200、400背景高還可做上去,選一個好的???釋比例,再正式做,工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原 性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原活性,做化 時不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交 的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
1.產(chǎn)品名稱如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時,或位于酶的催化位點(diǎn)時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA試劑盒人腺來源的內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T (tert-Butoxycarbonyl)oxycefcapene pivoxil 105889-80-3 中文名: 分子式:C28H37N5O10S2
HumanelonginA,EloAELISA試劑盒人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T (Z)-Butylidenephthalide 中文名: 分子式:C12H12O2
Humanelecon-ansfer-flavoproteinbetapolypeptide,ETFBELISA試劑盒人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1-(2-Amino-5-chlorophenyl)-1-(trifluoromethyl)-3-cyclopropyl-2-propyn-1-ol 209414-27-7 中文名: 分子式:C13H11ClF3NO
HumanElastin,ELNELISA試劑盒人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile 中文名: 分子式:C7H9ClN2O
HumanElastaseELISA試劑盒人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1,18-Octadecanediol 中文名: 分子式:C18H38O2
tlrl-mpla MPLA-SM 1 mg
tlrl-pb5lps LPS-B5 Ultrapure 5 mg
tlrl-peklps LPS-EK Ultrapure 1 mg
tlrl-rslps LPS-RS 5 mg
tlrl-smlps LPS-SM Ultrapure 5 mg
鄰異丙基甲苯 標(biāo)準(zhǔn)品 2,6-Toluenediisocyanate 527-84-4 純品型,10mg 特征形態(tài) 固態(tài)
異稻瘟凈 標(biāo)準(zhǔn)品 Phorate-sulfone 26087-47-8 純品型,0.1g 特征形態(tài) 固態(tài)
Hydroxymethyl phosphonic acid,certified Hydroxymethylphosphonicacid 2617-47-2 純品型,100MG 特征形態(tài) 固態(tài)
Anti-phospho-PI3K/PIK3CD(Tyr524)抗體高純胞漿S100蛋白制備試劑盒 20次
細(xì)胞可溶性總蛋白制備試劑盒 20次
組織可溶性總蛋白制備試劑盒 20次
植物組織可溶性總蛋白粗提制備試劑盒 20次
植物組織可溶性總蛋白完全制備試劑盒 20次
應(yīng)用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等實(shí)驗(yàn),質(zhì)量保證,無效免費(fèi)退換,另外本公司長期供應(yīng)化抗體、WB抗體、化試劑盒和抗體試驗(yàn)所需全部相關(guān)試劑、熒光標(biāo)記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標(biāo)記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實(shí)驗(yàn)抗體。
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