抗體的鑒定:產(chǎn)品僅用于科研
1)抗體的效價鑒定:不管是用于診斷還是用于制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴散試驗,酶聯(lián)吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
2)抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計算交叉反應(yīng)率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
3)抗體親和力:是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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Anti-PKA gamma抗體
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0.2ml/200μg
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XG-01K85837
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英文名稱 Anti-PKA gamma
中文名稱 蛋白激酶Aγ抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Sheep
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
蛋白分子量 predicted molecular weight: 40kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PKA gamma
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
別 名 KAPG; PKA C gamma; PRKACG; Protein kinase cAMP dependent catalytic gamma; Serine (threonine) protein kinase; KAPCG_HUMAN.
稀釋方法:
方法1. 實驗前,將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋(或PBS稀釋),將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反復(fù)凍溶。
方法2. 實驗前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 預(yù)試驗可做幾個梯度1:100、200、400背景高還可做上去,選一個好的稀釋比例,再正式做,工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結(jié)論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原 性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組???的抗原活性,做化 時不需抗原修復(fù)這一步。缺點是細胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細胞結(jié)構(gòu),可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點可以保持組織細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交 的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
實驗要點:
1.產(chǎn)品名稱如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細胞的熒光標(biāo)記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導(dǎo)致高本底。
Leptin (126-140) (human) RNIAEIIKDI Kisspeptin-13 (human) Interleukin-6 (88-121)(human) Hirudin (54-65)(desulfated)
Entero-Hylambatin RKGDIKSY-pNA HIV-1 env Protein gp41(1-23) amide (isolates BRU/JRCSF) KRWIILGLNKIVRMYC Acetyl-Hirudin (53-65)(sulfated), Hirugen
Hylambatin Abz-ETLFQGPVl-p-nitro-Phe-NH2 HIV-1 env Protein gp120 (278-292) (strains BH10,BH8, HXB2, H Anthranilyl-HIV Protease Substrate VI Hippuryl-Phe-Arg-OH
Hydrin 2, (Arg8,Gly10)- Vasotocin SQNYPIV HIV Protease SubstrateIV Anthranilyl-HIV Protease Substrate V Hippuryl-Phe-OH
Hydrin 1',(Arg8,Gly10,Lys11)- Vasotocin Asn-Ala-Intercellular Adhesion Molecule 1 (1-21) (human) HIV Protease SubstrateIII Anthranilyl-HIV Protease Substrate IV Hippuryl-Lys-Val-OH
絲立尼亭 HPLC≥98% 20mg 小鼠細胞周期素D2(CCND2)ELISA試劑盒 ,英文名: CCND2 ELISA Kit
絡(luò)石苷元 HPLC≥98% 20mg 兔誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISA檢測試劑盒Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKIT 96T/48T
細辛脂素 HPLC≥98% 20mg 牛(NO)試劑盒 Bovine Niic Oxide,NO ELISA Kit
款冬酮 HPLC≥98% 20mg 英文名稱HumanG-CSFELISAKit人粒細胞克隆刺激因子(G-CSF)規(guī)格:96T/48T
山麥冬皂苷B HPLC≥95% 20mg 蛋類總?cè)樗岜壬ǘ繖z測試劑盒20
波棱酮 HPLC≥95% 20mg Ratnicotinicacetylcholinereceptor,N-AChRELISA試劑盒大鼠型乙酰膽堿受體(N-AChR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
羥基葛根素 HPLC≥98% 20mg 小鼠細胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒 ,英文名: Cyclin-D1 ELISA Kit
短葶山麥冬皂苷C HPLC≥95% 20mg 小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA檢測試劑盒MouseMucin-5subtypeAC,MUC5ACELISAKit 96T/48T
單葡萄糖醛酸甘草酸 HPLC≥98% 20mg 人黑色素瘤試劑盒 Human melanoma ELISA Kit
甲氧基betaD吡喃葡萄糖苷 HPLC≥98% 20mg RatCyclosporineA,CsAELISAKit大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
惡嗪草酮(去稗安) 標(biāo)準(zhǔn)品 Azaperone 153197-14-9 純品型,10mg 特征形態(tài) 固態(tài)
氟噻唑吡乙酮 標(biāo)準(zhǔn)品 Metalaxyl 1003318-67-9 純品型,10mg 特征形態(tài) 固態(tài)
環(huán)氧嘧磺隆(Oxasulfuron) 標(biāo)準(zhǔn)品 Metalaxyl 144651-06-9 純品型,0.1g 特征形態(tài) 固態(tài)
Anti-PKA gamma抗體熒光細胞流式儀完全間接檢測試劑盒(含一抗和熒光二抗) 10次
熒光細胞流式儀直接檢測試劑盒(含熒光一抗) 10次
細胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試劑盒(無一抗和二抗) 50次
細胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB間接檢測試劑盒(含HRP二抗) 20次
細胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB完全間接檢測試劑盒(含一抗和HRP二抗) 10次
應(yīng)用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等實驗,質(zhì)量保證,無效免費退換,另外本公司長期供應(yīng)化抗體、WB抗體、化試劑盒和抗體試驗所需全部相關(guān)試劑、熒光標(biāo)記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標(biāo)記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實驗抗體。
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