操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存
方法二：使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無需自己配制，無需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒問題后再批量應(yīng)用。
細胞特性
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產(chǎn)品名稱
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AML-12小鼠肝實質(zhì)細胞
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英文名稱
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AML-12:AML12
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分類
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小鼠細胞系
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貨號
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XG-X3611
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組織來源
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肝臟
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形態(tài)
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上皮細胞樣
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生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認）
生長培養(yǎng)基:
DMEM/F12＋10% FBS＋0.5% ITS-G（100×）＋40ng/ml Dexamethasone＋1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:4-1:6
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來源文獻)
背景描述 The AML12 (alpha mouse liver 12)
cell line was established from hepatocytes from a mouse (CD1 strain, line MT42)
transgenic for human TGF alpha.
年齡（性別） 雄性；3月齡
組織來源 肝臟
細胞類型 自發(fā)永生化細胞
生物等級 BSL-1
倍增時間 ~37 hours
致瘤性 NO
基因表達情況 albumin; human transforming
growth factor alpha (TGF alpha); mouse TGF alpha.
保藏機構(gòu) ATCC; CRL-2254 BCRC; 60326
BCRJ; 0354
運輸和保存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備
1） 準備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
細胞處理
1） 凍存細胞的復(fù)蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
支架蛋白IQGAP2抗體
IQGAP2
自噬相關(guān)蛋白10抗體
Apg10
細胞N-鏈接硫酸酯化糖胺多糖（N-sGAG）含量二甲基亞甲基藍（DMMB）比色法定量檢測試劑盒
小鼠白介素4(IL-4)elisa檢測試劑盒
單胺氧化酶測試盒
CYP1A2蛋白共沉淀分析試劑盒
RAS癌基因家族蛋白RAB40A抗體
RAB40A
表皮生長因子樣蛋白2抗體
CELSR2
葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶抗體 Anti-UGCG/Ceramide glucosyltransferase
泛酸激酶2抗體 Anti-PANK2
Ⅱ型膠原α1 N端前體肽抗體 Anti-procollagen type IIA
精神障礙相關(guān)GAP蛋白抗體 Anti-srGAP3
APC標記的羊抗兔IgG H&L
AML-12小鼠肝實質(zhì)細胞Goat
Anti-Rabbit IgG H&L / APC
鋅指蛋白399抗體
ZDHHC11/ZNF399
牛心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)elisa分析檢測試劑盒
cTn-T ELISA kit
小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)elisa分析檢測試劑盒
HMGB-1ELISAKit
倉鼠白介素3(IL-3)elisa分析檢測試劑盒
IL-3 ELISA Kit
人電子轉(zhuǎn)運黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉(zhuǎn)運黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)elisa分析檢測試劑盒
HumanETFDHELISAkit
癌/睪丸抗原抗體86抗體
OIP-5/CT86
9號染色體開放閱讀框89抗體
C9orf89
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