細(xì)胞特性
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產(chǎn)品名稱
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B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞
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英文名稱
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B16:B16
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分類
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小鼠細(xì)胞系
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貨號
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XG-X3614
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組織來源
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黑素瘤
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形態(tài)
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成纖維細(xì)胞樣
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生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 B16系列細(xì)胞，使用DMEM培養(yǎng)時可能出現(xiàn)黑色su快速積累，細(xì)胞不增殖或死亡的情況，該細(xì)胞正常擴(kuò)增凍存請使用RPMI-1640完培，若您需要進(jìn)行分泌黑色su等后續(xù)相關(guān)實驗，可以在擴(kuò)增凍存細(xì)胞后更換為DMEM培養(yǎng)來滿足實驗設(shè)計。
背景描述 B16細(xì)胞是一株小鼠黑su瘤細(xì)胞。
年齡（性別） 不詳
組織來源 黑su瘤
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 黑色su瘤細(xì)胞
生物等級 1
保藏機(jī)構(gòu) JCRB; JCRB0202 KCB; KCB
93030YJ RCB; RCB1283 TKG; TKG 0144
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
細(xì)胞處理
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
清道夫受體B2抗體 Scavenger Receptor BII
染色質(zhì)修飾蛋白2B抗體 CHMP2B
HAUS8蛋白抗體 HAUS8
INTS5蛋白抗體 INTS5
孕受體單克隆抗體 Progesterone Receptor
著絲粒蛋白36抗體 MSL1v1/CENP36
復(fù)制因子A蛋白2
RPA32
鈣激活鉀通道蛋白β2抗體 KCNMB2
細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體 XBP1
細(xì)胞色素P450 19抗體 Aromatase
TRM11蛋白抗體 TRM11
ZC3H12C蛋白抗體 ZC3H12C
ALDH3A2抗體 ALDH3A2
APC標(biāo)記小鼠CD45.2單克隆抗體 mouse CD45.2/APC
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白28A抗體 CCDC28A
連接粘附分子1抗體 JAM1
DHPR受體蛋白共沉淀分析試劑盒
B16小鼠黑色素瘤??胞葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒
核酸蛋白結(jié)合凝膠遷移電泳分析（EMSA）試劑盒
小鼠二肽基肽酶4(DPP4)elisa檢測試劑盒
人表皮生長因子(EGF)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
12-羥基二十四烯酸（12-HETE）高效液相色譜法定量檢測試劑盒
小鼠抑制素A（INH-A）elisa檢測試劑盒
大鼠硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)elisa檢測試劑盒
大鼠D-乳酸elisa檢測試劑盒
小鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)elisa檢測試劑盒
人Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)elisa分析檢測試劑盒
通用型血液對氧磷酶1（PON1）有機(jī)磷酸酶活性比色法定量檢測試劑盒
半椎蛋白2抗體
HMCN2
ABI基因家族2抗體
ABI3
操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存
方法二：使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無需自己配制，無需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒問題后再批量應(yīng)用。
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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