操作步驟：
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測(cè)試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應(yīng)用。
細(xì)胞特性
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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bEnd.3 [BEND3]（小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株）
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英文名稱(chēng)
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bEnd.3 BEND
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分類(lèi)
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小鼠細(xì)胞系
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貨號(hào)
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XG-X9183
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組織來(lái)源
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腦微血管
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形態(tài)
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上皮細(xì)胞樣
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細(xì)胞別稱(chēng)；bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3;
brain-derived Endothelial cells.3；小鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞
種屬來(lái)源；小鼠
年齡性別；6周齡
組織來(lái)源；腦微血管
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介；細(xì)胞用表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行轉(zhuǎn)化。觀(guān)察到血管性血友病因子的表達(dá)及對(duì)熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）的攝入確認(rèn)其內(nèi)皮細(xì)胞特性。bEnd.3 cells細(xì)胞可用細(xì)胞因子和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)細(xì)胞的Peyer＇s結(jié)高內(nèi)皮細(xì)胞受體，粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及內(nèi)皮細(xì)胞選擇素的表達(dá)。腫瘤壞死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的誘導(dǎo)作用是濃度及時(shí)間依賴(lài)的。
細(xì)胞代數(shù)；10代以?xún)?nèi)
背景介紹；Bend.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染了表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。
生物等級(jí)；1
細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)；無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-2299 BCRC; 60515
ECACC; 96091929
培養(yǎng)基；90%DMEM+10%FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
細(xì)胞處理
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。天顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
磷酸烯醇丙酮酸羧激酶抗體
PCK1
CBX7蛋白抗體
CBX7
磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 Anti-phospho-TNIK(Ser769)
內(nèi)脂素/前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子-2（C端抗體） Anti-PBEF (CT)
PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK5A蛋白抗體 Anti-PDZD5A/FRMPD2L2
管內(nèi)皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞受體1抗體 Anti-stabilin1/STAB 1
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgG H&L
Rabbit Anti-Horse IgG
H&L / PE-Cy7
EHD4蛋白抗體
EHD4
鋅指FYVE結(jié)構(gòu)域蛋白27抗體 Anti-ZFYVE27
利鈉肽受體B抗體 Anti-Natriuretic Peptide Receptor B
細(xì)胞周期檢控Rad17蛋白抗體（復(fù)制因子C） Anti-Rad17/RFC
磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 Anti-phospho-c-Abl(Ser569)
大鼠8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
bEnd.3
[BEND3]（小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株）8-OHdG ELISA Kit
人甘露糖(Mannose)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanMannoseELISAKit
大鼠心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素油性紅原位直接染色試劑盒
兔膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CHAT)elisa檢測(cè)試劑盒
肉類(lèi)抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒
MCCC1蛋白抗體
MCCC1
19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框48抗體
C19orf48
Fas相互作用蛋白激酶3抗體
HIPK3
擬南芥ACA11抗體
ACA11
- 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買(mǎi)前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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