操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
注:本公司提供試劑盒免費代測服務(wù)。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
產(chǎn)品名稱:β乳球蛋白試劑盒
產(chǎn)品貨號:BJ-100430
規(guī)格:48T/96T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本..
組成:
48孔配制:
1.說明書: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個
4 酶標(biāo)包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產(chǎn)品名稱說明書:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個
4. 酶標(biāo)包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標(biāo)準(zhǔn)品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標(biāo)試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)
羊抗牛IgG (FITC標(biāo)記)Anti-Bovine IgG-FITC antibody produced...Null1ML
兔抗生物素 (FITC標(biāo)...Anti-Biotin-FITC antibody produced in ...Null1ML
兔抗親和素 (FITC標(biāo)...Anti-Avidin-FITC antibody produced in ...Null1ML
N-羥基-5-降冰片稀-...HONB (97%)21715-90-210G
兔抗綿羊IgG (抗血清)Anti-Sheep IgG antibody produced in ra...Null1ML
兔抗大鼠IgG (抗血清)Anti-Rat IgG antibody produced in rabbitNull1ML
羊抗大鼠IgG (抗血清)Anti-Rat IgG antibody produced in goatNull1ML
羊抗兔IgG (抗血清)Anti-Rabbit IgG antibody produced in g...Null1ML
羊抗豬IgG (抗血清)Anti-Pig IgG antibody produced in goatNull1ML
1-羥基-苯并-三氮唑1-Hydroxybenzotriazole (≥99.0%,HOBt)2592-95-225G
兔抗HRP (抗血清)Anti-Peroxidase antibody produced in r...Null1ML
兔抗小鼠血清 (多價...Anti-Mouse Serum antibody produced in ...Null1ML
β乳球蛋白試劑盒EMP3 上皮細(xì)胞膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlELL2 聚合酶延伸因子2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Bad(Ser118) 磷酸化相關(guān)死亡促進因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy3 Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER4 (Tyr1162) 磷酸化HER4抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-c-Jun(Tyr170) 磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1mlbeta 2 Microglobulin β2微球蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
CK15 細(xì)胞角蛋白15抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP24A1 細(xì)胞色素P450 24A1抗體 規(guī)格: 0.2ml
RABGAP1 Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlCOX7A2 細(xì)胞色素c氧化酶VIIA亞型2抗體 0.1ml
Mast Cell Tryptase 肥大細(xì)胞蛋白酶7抗體 規(guī)格: 0.1mlFactor VII light chain 凝因子VII 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1185) 磷酸化胰島素受體β抗體 規(guī)格: 0.1mlCollagen VII 7型膠原抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779) 磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶A3+A4+A5抗體 規(guī)格: 0.1ml
SPARCL1/Ecm2 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-NMDAR1(Ser897) 磷酸化谷氨酸受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
FDC-SP/ADC 濾泡樹突細(xì)胞分泌蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-mTOR (Thr2446) 磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
ACHE/Acetylcholinesterase 乙酰膽堿酶抗體 0.1ml
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