實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

我司全程提供細(xì)胞生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存細(xì)胞株說明書信息，我們專業(yè)您的細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)，讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾！

英文簡稱：HUCA-C細(xì)胞

產(chǎn)品名稱：正常宮頸上皮細(xì)胞

貨號：BJ-01X10690

規(guī)格：宮頸；上皮細(xì)胞

形態(tài)特性:1640

生長特性:貼壁

細(xì)胞傳代步驟： 
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 :

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

培養(yǎng)操作:

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

使用方法：

收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

樹脂法精液DNA萃取試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

通用型DNA克隆試劑盒（不包括內(nèi)切酶） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

通用型DNA克隆完全試劑盒（包括內(nèi)切酶） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

DNA定向連接克隆完全試劑盒（包括雙內(nèi)切酶） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

通用型DNA平滑末端連接克隆試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

通用型DNA平滑末端連接克隆完全試劑盒（包括內(nèi)切酶） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

pZERO載體克隆試劑盒（不包括內(nèi)切酶） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

pZERO載體克隆試劑盒（包括內(nèi)切酶） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

GMS10電擊感受態(tài)細(xì)轉(zhuǎn)化試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

pZERO載體克隆鑒定試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PCR產(chǎn)物末端平滑處理試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

DNA產(chǎn)物磷酸化處理試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

載體/DNA產(chǎn)物去磷酸化處理試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

正常宮頸上皮細(xì)胞100g DNA級GuSCN（異硫酸胍）  

腸桿科細(xì)生化編碼鑒定管 GYZ-15e 16種×5次 本系列由15項(xiàng)組成，鑒定腸桿科中常見73的種細(xì)。根據(jù)生化反應(yīng)結(jié)果，查《腸桿科細(xì)生化鑒定... 16種×5次/盒

10次 克必隆eTS miRNA RT-PCR試劑盒  

25g 玉米蛋白 Zein 室溫保存

改良Skirrow瓊脂添加劑 Modified Skirrow Agar Additives 1ml*5支

異烏藥內(nèi)酯 linderalactone 728-61-0 20mg

AHM鑒別培養(yǎng)基 用于致病性嗜水氣單胞鑒別，適用于GB/T 18652-2002和SN/T 0751-2010嗜水氣單胞檢驗(yàn) 250g

100mL DIPSO Buffer,0.2M,pH8.0  DIPSO Buffer,0.2M,pH8.0  常溫保存

Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基（不含瓊脂） 用于含微生物樣品的采集、運(yùn)送和保存，特別是空腸彎曲、霍亂弧、副溶血性弧、沙門氏和志... 100g

250g 聚乙二醇 8000 PEG8000 室溫保存

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏生化鑒定盒 初步鑒定小腸結(jié)腸炎耶爾森氏常規(guī)生化反應(yīng)9項(xiàng)(參考“食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 4789.8-2008... 10種×10次/盒

2 ug pcDNA4/HisMax B pcDNA4/HisMax B 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

100uL 蘋果actin PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存

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