細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
原代細(xì)胞分離：
訂購(gòu)信息：
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：B82-C1022細(xì)胞
產(chǎn)品名稱(chēng)：轉(zhuǎn)EGFR受體突變體的小鼠肺成纖維細(xì)胞
貨號(hào)：BJ-01X10721
規(guī)格：BSL-1
形態(tài)特性:DMEM高糖 90%，胎牛血清 10%（1521/1531）
生長(zhǎng)特性:成纖維細(xì)胞
【培養(yǎng)指南】
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
【細(xì)胞凍存】
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行293/HEK-293細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
【復(fù)蘇的原則】
快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫(kù)各地均可發(fā)貨，統(tǒng)一價(jià)格，本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。
一、細(xì)胞培養(yǎng)
1取材 在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱(chēng)為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇（可參閱后面有關(guān)章節(jié)）為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。
二、原代細(xì)胞分離
凡是來(lái)源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來(lái)的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱(chēng)之為原代細(xì)胞。1懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。2實(shí)體組織材料的分離方法對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。
三、細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)
目前主要有兩種用于檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的方法。一種是直接的方法，通過(guò)直接測(cè)定進(jìn)行分裂
的細(xì)胞數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。另一種是間接的方法，即細(xì)胞活力（cell viability）檢測(cè)方法，通過(guò)檢測(cè)樣品中健康細(xì)胞的數(shù)目來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。顯然，細(xì)胞活力檢測(cè)法并不能終證明檢測(cè)樣品中的細(xì)胞是否在增殖。如細(xì)胞在某一培養(yǎng)條件下會(huì)自發(fā)啟動(dòng)凋亡程序，但的干擾可抑制凋亡的發(fā)生；這時(shí)若采用細(xì)胞活力檢測(cè)法，顯然可以區(qū)分兩種條件下的細(xì)胞數(shù)量，但我們并不能從干擾組細(xì)胞數(shù)大于對(duì)照組的事實(shí)說(shuō)明可促進(jìn)細(xì)胞增殖的結(jié)論。所以直接的證據(jù)應(yīng)該采用方法一。
其中常見(jiàn)檢測(cè)：CCK8檢測(cè)法 ，MTT檢測(cè)法，Brdu檢測(cè)法，Edu檢測(cè)法，平板克隆形成。
四、細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)
細(xì)胞周期指由細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過(guò)程，所需的時(shí)間叫細(xì)胞周期時(shí)間。
常用的方法：流式檢測(cè)細(xì)胞周期，標(biāo)記有絲分裂百分率法。
五、細(xì)胞凋亡檢測(cè)
常見(jiàn)檢測(cè)方法：流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡，線粒體膜電位，活性氧檢測(cè)，Hoechst染色，電鏡，TUNEL。
電擊法 融合試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
甲基纖維素 克隆試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/50/80次
軟瓊脂 克隆試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
藍(lán)色熒光染色體核型分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：100次
熒光 流式儀分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
動(dòng)物 /組織線粒體粗提分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/50次
動(dòng)物 /組織活性線粒體分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/50次
動(dòng)物 /組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
動(dòng)物硬組織線粒體粗提分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次
動(dòng)物硬組織活性線粒體分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次
動(dòng)物硬組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：100次
活體 線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
轉(zhuǎn)EGFR受體突變體的小鼠肺成纖維細(xì)胞100mL 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 2B Sepharose CL-2B 4-8℃保存
2 ug pCDFDuet-1 pCDFDuet-1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
蒜氨酸 (S)-3-(Allylsulphinyl)-L-alanine 556-27-4 20mg
100mL RNase-Free Sodium Acetate Solution（無(wú)RNase的乙酸鈉溶液）,3M，pH7.0 RNase-Free Sodium Acetate Solution,3M，pH7.0 常溫保存
500mL Phospho-Protein Extraction Buffer II Phospho-Protein Extraction Buffer II 常溫保存
木糖-明膠培養(yǎng)基 Xylose - gelatin medium 250g
山梨醇生化鑒定管 細(xì)生化鑒定 20支/盒
1mL Oligo快速?gòu)?fù)性液，10× Oligo Rapid Renaturing Solution -20℃避光保存
2 ug pYD1 pYD1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
250mL SDS Solution（SDS溶液），20%，pH7.2 SDS Solution，20%，pH7.2 常溫保存
志賀氏增液（無(wú)） 用于志賀氏選擇性增培養(yǎng)。 225ml/X10袋
蒼術(shù)苷二鉀鹽 ATRACTYLOSIDE POTASSIUM SALT 102130-43-8 10mg
250mL Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.6 Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.6 常溫保存
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