基本信息:
產(chǎn)品名稱:蛹蟲草 斜面規(guī)格
拉丁文:
Cordyceps militaris
提供形式: 試管斜面
**等級: 1
模式菌株: no
應(yīng)用領(lǐng)域: 藥用
培養(yǎng)基: 綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。
生長條件: 25-28℃,好氧
存儲條件: 2-8℃,避光冷藏。
培養(yǎng)方法:
培養(yǎng)基 0012
生長條件 28℃
存儲條件 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
培養(yǎng)及打管說明:
1、安瓿瓶開封:用浸過75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng):用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴入安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液,移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,并在建議的條件下培養(yǎng)。
3、注意事項:菌種活化前,請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,延遲期較長,需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長
4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。
5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
保藏方法:
1. 傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧**用),培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2. 液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長保藏時間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進(jìn)??,以減弱代謝作用。
3. 載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,而后進(jìn)行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4. 寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物,如病毒、立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代,此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5. 冷凍保藏法
可分低溫冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6. 冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥)。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來制備細(xì)胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。
沙門氏顯色培養(yǎng)基(SA) 1000mL/瓶
假單胞瓊脂基礎(chǔ) (CM0559) Oxoid
m EC-broth with Nocobiocin mEC肉湯(含新生霉素) 1.14582.0500MERCK默克
去氧膽酸鹽瓊脂(DC) 1000(g)
Selective agar for pathogenic fungi致病真選擇瓊脂 1.05467.0500MERCK默克
賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 5(g)
平板計數(shù)瓊脂 高營養(yǎng)培養(yǎng)基,用于分離、計數(shù)異養(yǎng)或“富營養(yǎng)”的細(xì),水、廢水、食品、乳制品的細(xì)計數(shù)500g
葡萄糖半固體培養(yǎng)基 250(g)
DMEM(低糖),干粉 含1000mg/l葡萄糖,L-谷氨酰胺,
110mg/l丙酮酸鈉,不含碳酸氫鈉31600-034
氯化三苯四氮唑-沙保羅培養(yǎng)基 250(g)
紫色麥康凱肉湯 (US 配方) (CM0006a) Oxoid
蛹蟲草 斜面規(guī)格HDHD1 HDHD1蛋白抗體 0.2ml
Nebulette 肌動蛋白結(jié)合蛋白Z盤狀蛋白抗體 0.2ml
Pregnancy zone protein 妊娠區(qū)帶蛋白PZP抗體 0.2ml
Ceruloplasmin 銅藍(lán)蛋白抗體 0.1ml
FAK/PTK2 粘著斑激酶抗體 0.1ml
HBAB/AKR1C2 膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體 0.2ml
FAM161A FAM161A蛋白抗體 0.2ml
Proteasome 26S S2/TRAP2 腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
EDG1/CD363/S1P1 內(nèi)皮細(xì)胞分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體1抗體 0.2ml
JAMC 連接粘附分子C抗體 0.2ml
NT5C2 胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ抗體 0.1ml
ERAB/HSD17B10 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
RAB8B ras癌基因家族RAB8B抗體 0.2ml
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng),有時母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為種子,把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級種子,將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱為四級發(fā)酵。
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