PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
訂購信息:
產品名稱:病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)PCR實驗試劑
英文名稱:詳見說明
貨號:BJ-01R4941
產品規(guī)格:48T/盒
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
CTDSPL Human 25mg Acetyl Pentapeptide-1 5mg
(+)-SHIN1 1mg AZD7545 2mg
LLO PEST free 50mg TM5275 sodium 100mg
MDL-29951 5mg 8(S)-HETrE 25mg
PACAP-38 (31-38), human, mouse, rat TFA 2μg 3-dodecanoyl-NBD Cholesterol 1mg
UGDH Human 5mg [Met5]-Enkephalin, amide TFA 10μg
HIV-1 TAT, Biotin 50mg Debromohymenialdisine 1mg
FLT3-IN-2 50mg PIK-90 250mg
URB754 50mg (Ala2)-Leu-Enkephalin 10mg
NGI-1 (ML414) 500μg PF-4878691 (3M-852A) 1mg
6α-Oxycodol N-oxide 500mg PCNA-I1 1mg
TP 003 10mg H-Trp-OBzl.HCl 1mg
CEA Human 1mg FDI-6 50mg
Ro 22-3245 20μg Germacrene D 10mg
H-D-Leu-Leu-OH 2μg Isopropamide iodide 5μg
病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)PCR實驗試劑Pyroxamide Pyroxamide 是一種有效的組蛋白脫乙?;?1 (HDAC1) 抑制劑,ID50 為 100 nM。Pyroxamide 可以誘導白血病細胞凋亡和細胞周
SB-399885 SB399885 is a 5-HT6 Antagonist.
SB-590885 SB-590885 是一種有效的 B-Raf 抑制劑,Ki 值為 0.16 nM;對其選擇性是對 c-Raf 的 11 倍多。
Volasertib(BI6727) Volasertib 是一種高效的 Polo-like 激酶 1 (PLK1) 抑制劑,IC50 值為 0.87 nM,同時能夠抑制 PLK2 和 PLK3,I
VX-11e VX-11e 是一種高效的,具有選擇性的,可口服的 ERK 抑制劑,Ki 值 < 2 nM。
AMG337 AMG-337是一種有效的高度選擇性的ATP競爭性MET激酶抑制劑, IC50 < 5 nM。
AZD3264 AZD3264 是一種 IkB 激酶 IKK2 抑制劑。
AZD8835 AZD8835 是一種有效的選擇性 PI3Kα 和 PI3Kδ 抑制劑,IC50 分別為 6.2 和 5.7 nM。
BMS599626 BMS-599626 (AC480) 是一種選擇性的口服生物利用度 HER1 和 HER2 抑制劑,其 IC50 分別為 20 和 30 nM。BMS-5996
BPTES BPTES是選擇性的谷氨酰胺酶變構抑制劑,IC50 為0.16 μM。
- 溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買前務必確認供應商資質與產品質量。
- 免責申明:以上內容為注冊會員自行發(fā)布,若信息的真實性、合法性存在爭議,平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理,歡迎舉報