訂購信息:
產(chǎn)品名稱:肉毒桿菌A/B型(CB-A/B)熒光定量PCR試劑
英文名稱:詳見說明
貨號:BJ-01R5107
產(chǎn)品規(guī)格:48T/盒
運輸:低溫
保存:負20度
有效期:一年
貨期:現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】:
u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
u 運輸:采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒,也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
T 26c disodium salt 1mg Nimbin 1mg
Fumarate hydratase-IN-2 sodium salt 10mg Seselin 1g
Pivagabine 2μg HCV Core Genotype-3/10 1mg
Luciferase, firefly 5mg ZINC00881524 20μg
H-Gly-Met-OH 25g CAY10510 1mg
PF-06282999 25mg Cyclo(-Ser-Ser) 5mg
PKNOX1 Human 5mg PROTAC CDK9 Degrader-1 10g
NVP-AEW541 10mM*1mLinDMSO Oritavancin (phosphate) 10mg
Fmoc-D-Thr-ol 25μg 2-Pyridylamide oxime 10mg
PD 174265 5mg BMY-43748 25mg
RPL5 Human 1mg TGFBR1 Human 50mg
NO-Indomethacin 10μg Cefathiamidine 10mg
KPT-9274 1mg 4-Methylumbelliferyl-2-acetamido-2-deoxy-β-D-Glucopyranoside 5mg
SP 100030 100mg SMCC-DM1 (DM1-SMCC) 2μg
Fmoc-(Dmb)Leu-OH 500μg Illudin S 25mg
肉毒桿菌A/B型(CB-A/B)熒光定量PCR試劑FLLL32 FLLL32,一種姜黃素的合成類似物,是 JAK2/STAT3 的雙重抑制劑,具有抗腫瘤癌活性。
替吡法尼;Tipifarnib (R115777; IND 58359) Tipifarnib (R115777; IND 58359) 是一種具有潛在抗腫瘤活性的非擬肽喹啉酮。Tipifarnib (R115777; IND 583
3-(3,4-Dihydroxyphenyl)acrylaldehyde N/A
A-83-01 A 83-01 是有效的 TGF-β I 型受體 ALK5,ALK4 和 ALK7 的抑制劑,能夠抑
GENZ-644282 Genz-644282 是一種非喜樹堿類拓撲異構(gòu)酶 I (topoisomerase I) 抑制劑,可用于癌癥研究。
JNJ-40411813 (ADX-71149) JNJ-40411813 (ADX-71149) 是一新型 mGlu2R 正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑,EC50 值為 147 nM。
甲磺酸洛美他派;Lomitapide mesylate (AEGR-733 mesylate; BMS-201038 mesylate) Lomitapide(AEGR-733; BMS-201038)甲磺酸鹽是高效MTP蛋白抑制劑,體外IC50值為8nM。
洛美他派;Lomitapide (AEGR-733; BMS-201038) Lomitapide (AEGR-733; BMS-201038)是高效的微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白(MTP)抑制劑, 體內(nèi)試驗的IC50值為8 nM。
PF-562271 besylate (PF562271 besylate; PF 562271 besylate) PF-562271 besylate 是有效,可逆,ATP競爭性的 FAK 和 Pyk2 激酶抑制劑,IC50
TA103(bms-247615) TAS-103 是一種 DNA 拓撲異構(gòu)酶 I/II (topoisomerase I/II) 雙重抑制劑,可用于癌癥研究。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
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