一抗操作步驟：
一抗的操作步驟主要包括封閉、?一抗孵育和洗滌。?
封閉：?這一步驟的目的是為了防止非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)與抗體結(jié)合，?從而引起非特異的染色和背景。?通常使用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑來(lái)封閉膜上的未結(jié)合位點(diǎn)，?以降低抗體的非特異性結(jié)合。?常用的封閉試劑有5%的BSA或脫脂奶粉，?緩沖液一般選擇PBST或TBST。?封閉條件通常為室溫或37℃緩慢搖動(dòng)1～2小時(shí)，?特殊情況也可4℃過(guò)夜。?封閉完成后需要進(jìn)行洗膜，?以去除膜上未結(jié)合的封閉試劑。?
一抗孵育：?在一抗孵育之前，?需要參考一抗的說(shuō)明書，?按照適當(dāng)比例用封閉液稀釋一抗。?吸盡封閉液后，?立即加入稀釋好的一抗，?室溫或4℃在搖床上緩慢搖動(dòng)孵育1～2小時(shí)。?如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳，?可以在4℃緩慢搖動(dòng)孵育過(guò)夜。?然后回收一抗，?加入Western洗滌液，?在搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘，?共洗滌3次。?如果結(jié)果背景較高，?可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。?
洗滌：?洗滌的目的是為了洗去一抗的非特異性結(jié)合，?洗滌的效果直接影響結(jié)果背景的深淺。?建議使用PBST或TBST作為洗滌液，?其中的Tween20有助于去除非特異性的結(jié)合，?減少背景。?洗滌的次數(shù)和時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，?建議清洗3-5次，?每次5分鐘。
腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體
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貨號(hào)
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規(guī)格
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價(jià)格
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用途
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BJ003841
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50ul
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1380
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僅供科研實(shí)驗(yàn)
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BJ003841
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100ul
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2380
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僅供科研實(shí)驗(yàn)
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BJ003841
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200ul
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3480
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僅供科研實(shí)驗(yàn)
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商品屬性：
英文名稱：AMPK gamma 3
中文名稱：腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體
別 名；5 AMP activated protein kinase subunit gamma 3; AMPK gamma 3 chain; AMPK gamma3; AMPKG3; Protein kinase AMP activated gamma 3 non catalytic subunit; AAKG3_HUMAN.
研究領(lǐng)域； 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
抗體來(lái)源；Rabbit
克隆類型；Polyclonal
交叉反應(yīng)；(predicted: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep, )
產(chǎn)品應(yīng)用；ELISA=1:5000-10000
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理論分子量；54kDa
細(xì)胞定位；細(xì)胞核 細(xì)胞漿 細(xì)胞膜
性 狀；Liquid
濃 度；1mg/ml
免 疫 原；KLH conjugated synthetic peptide derived from human AMPK gamma 3: 151-250/489
亞 型；IgG
純化方法；affinity purified by Protein A
保存條件；Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)；This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
產(chǎn)品介紹：
AMP/ATP-binding subunit of AMP-activated protein kinase (AMPK), an energy sensor protein kinase that plays a key role in regulating cellular energy metabolism. In response to reduction of intracellular ATP levels, AMPK activates energy-producing pathways and inhibits energy-consuming processes: inhibits protein, carbohydrate and lipid biosynthesis, as well as cell growth and proliferation. AMPK acts via direct phosphorylation of metabolic enzymes, and by longer-term effects via phosphorylation of transcription regulators. Also acts as a regulator of cellular polarity by remodeling the actin cytoskeleton; probably by indirectly activating myosin. Gamma non-catalytic subunit mediates binding to AMP, ADP and ATP, leading to activate or inhibit AMPK: AMP-binding results in allosteric activation of alpha catalytic subunit (PRKAA1 or PRKAA2) both by inducing phosphorylation and preventing dephosphorylation of catalytic subunits. ADP also stimulates phosphorylation, without stimulating already phosphorylated catalytic subunit. ATP promotes dephosphorylation of catalytic subunit, rendering the AMPK enzyme inactive.
抗體注意事項(xiàng)：
確定抗體的名字和特性：?注意抗體的中英文名字、?它名、?亞型等信息，?這些信息對(duì)于選擇正確的抗體至關(guān)重要。?
明確實(shí)驗(yàn)類型：?了解你的實(shí)驗(yàn)類型（?如ELISA、?WB、?IHC、?ICC或FACS）?，?因?yàn)榭贵w的說(shuō)明書通常會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)的實(shí)驗(yàn)類型。?如果說(shuō)明書沒(méi)有提及某種應(yīng)用類型，?并不意味著該抗體不適用于該實(shí)驗(yàn)，?只是表示尚未經(jīng)過(guò)該實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。?
選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)樣本種屬：?確定你的實(shí)驗(yàn)樣本是來(lái)自人類、?小鼠還是大鼠等，?因?yàn)榭贵w的說(shuō)明書會(huì)列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)的物種。?
考慮樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)：?了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇的抗體，?特別是當(dāng)樣本蛋白在提取和處理過(guò)程中可能會(huì)變性時(shí)，?這會(huì)影響抗體的親和反應(yīng)。?
單多克隆抗體的選擇：?單克隆抗體特異性強(qiáng)但親和力相對(duì)小，?而多克隆抗體特異性稍弱但親和力強(qiáng)。?根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的抗體。?
注意抗體的特異性：?原的類型對(duì)抗體對(duì)靶蛋白的特異性有顯著影響。?應(yīng)選擇針對(duì)已充分表征的原產(chǎn)生的抗體，?避免使用不合適或質(zhì)量差的原產(chǎn)生的抗體。?
封閉液的選擇：?封閉液的選擇應(yīng)根據(jù)抗體說(shuō)明書進(jìn)行，?常用的封閉液包括脫脂奶粉和BSA。?封閉液的目的是封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，?降低背景噪音3。?
抗體孵育注意事項(xiàng)：?使用干凈的孵育盒子，?避免油脂等雜物沾到膜上造成非特異信號(hào)。?如果一次性需要檢測(cè)多個(gè)蛋白，?可以考慮將膜剪開(kāi)或采用其他技術(shù)如抗體洗脫液處理后再次使用膜
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