原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
以胚胎小鼠為例 1．取材：將孕鼠拉頸椎處死，投入75%酒精浸泡數(shù)秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術(shù)器械逐層分離皮膚和肌肉組織，打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無菌平皿內(nèi)。 2．用Hanks液洗滌3次，剪開取出胚胎。血液和筋膜等組織。 3．用彎頭剪把胚胎盡量剪碎，每個(gè)組織塊小于1mm3。在操作時(shí)應(yīng)盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進(jìn)行，即消化法和組織塊培養(yǎng)法。 4．若使用消化法，則將組織塊放人三角燒瓶內(nèi)加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無菌紗布過濾。取過濾液，800r/min離心5~10min收集細(xì)胞。棄上清，加入帶有雙抗的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 注：細(xì)胞分離的方法各實(shí)驗(yàn)室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質(zhì)酶等）。 5．若進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則不做步驟4，加入幾滴血清于組織塊中，再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個(gè)鋪展開，注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉(zhuǎn)倒置后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置2－3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉(zhuǎn)過來，從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基，使細(xì)胞接觸到培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。
小鼠腎近端小管上皮細(xì)胞
組織來源
腎臟組織
貨號
P-X1850
產(chǎn)品規(guī)格
5×105
生長特性
貼壁
產(chǎn)品類別
小鼠原代細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
鋪路石狀細(xì)胞 不規(guī)則細(xì)胞
細(xì)胞詳述：
腎單位是腎結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，由腎小體和腎小管組成。腎小管與腎小囊壁層相連的一條細(xì)長上皮性小管，具有重吸收和排泌作用 .腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)，分布位置和功能分成三部分；近端小管、髓袢和遠(yuǎn)端小管。
近端小管在對腎小球超濾液中蛋白質(zhì)、 Na+、HCO3-、Cl-、K+、Ca2+、PO43-,水與有機(jī)溶質(zhì)（葡萄糖與氨基酸）的重吸收中發(fā)揮著重要作用，約1/2的超濾液在近端小管處重吸收。
細(xì)胞特性：
1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腎臟組織。
2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白-18（CK-18）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
我們推薦使用 Delf原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。