人脾外周血單個(gè)核細(xì)胞
組織來源
脾臟組織
貨號
P-X1453
產(chǎn)品規(guī)格
5×105
生長特性
貼壁
產(chǎn)品類別
人原代細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
細(xì)胞是混合體系
細(xì)胞詳述:
脾是重要的器官,有造血、濾血、衰老血細(xì)胞及參與反應(yīng)等功能。也是細(xì)胞遷移和接受抗原刺激后發(fā)生應(yīng)到、產(chǎn)生效應(yīng)分子的重要場所。
脾臟作為機(jī)體大的器官,占全身組織總量的 25%,含有大量的細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,是機(jī)體細(xì)胞和體液的中心,通過多種機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用. 脾臟切除導(dǎo)致細(xì)胞和體液功能的紊亂,影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。
1)細(xì)胞來源于人正常脾臟組織。
2)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
3)細(xì)胞生長方式:細(xì)胞是混合體系,少量貼壁生長,大部分懸浮生長。
我們推薦使用 人原代脾外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)基 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟:
以胚胎小鼠為例 1.取材:將孕鼠拉頸椎處死,投入75%酒精浸泡數(shù)秒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術(shù)器械逐層分離皮膚和肌肉組織,打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無菌平皿內(nèi)。 2.用Hanks液洗滌3次,剪開取出胚胎。血液和筋膜等組織。 3.用彎頭剪把胚胎盡量剪碎,每個(gè)組織塊小于1mm3。在操作時(shí)應(yīng)盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進(jìn)行,即消化法和組織塊培養(yǎng)法。 4.若使用消化法,則將組織塊放人三角燒瓶內(nèi)加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無菌紗布過濾。取過濾液,800r/min離心5~10min收集細(xì)胞。棄上清,加入帶有雙抗的培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 注:細(xì)胞分離的方法各實(shí)驗(yàn)室不同,所采用的消化酶也不相同(如膠原酶,透明質(zhì)酶等)。 5.若進(jìn)行組織塊培養(yǎng),則不做步驟4,加入幾滴血清于組織塊中,再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個(gè)鋪展開,注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉(zhuǎn)倒置后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置2-3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉(zhuǎn)過來,從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基,使細(xì)胞接觸到培養(yǎng)基,放培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
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