實時定量PCR反應試驗結果處理:
1、如果有標準曲線,按照標準曲線計算。
2、一般都是相對量,則用delta delta CT方法來計算。
3、舉例如下:對照組基因A的CT值為20, 內(nèi)參(比如βactin)CT值15。實驗組基因A CT值18,內(nèi)參CT值14。
4、首先算加樣量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍?;駻: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因A的量在實驗組是對照組的4倍。但是由于加樣量是2倍,所以4處以2=2,后的相對量是2倍。
5、幾點注意:必須確定擴增的特異性,只有相同目標的CT值才能相減(擴增效率有可能不同),2的某次方只是理論值,實際擴增效率低于2,不用Syber Green。