PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶適反應(yīng)溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。應(yīng)用PCR儀設(shè)置指南如下:
1、按 PCR 儀正面左下角電源開關(guān),啟動(dòng) PCR 儀。
2、放 PCR 離心管,先把頂蓋向上扳,再往前推,露出放樣孔,PCR 管放入前應(yīng)加好反應(yīng)體系各組分,再放入 PCR 離心管。
3、反向重復(fù)第2步驟將頂蓋板向后拉,蓋好頂蓋。
4、按 F2“Create”新建一個(gè)擴(kuò)增的 PCR 程序。
5、按控制臺(tái)面右方上下左右方向鍵,可隨意移動(dòng)編輯位置,輸入需要的溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。
6、據(jù) PCR 離心管中加入的反應(yīng)體積總量,在“Reaction volume”后輸入相應(yīng)數(shù)值,有 Std“1~100ul”和 9600“1~50ul”兩檔可供選擇。
7、按 F1“Start”啟動(dòng)
8、按“INFO”對(duì)應(yīng)鍵查看 PCR 結(jié)束鍵。
9、擴(kuò)增完成后按臺(tái)面左方“Stop”鍵退出。
10、按“Hist”,可查看上次擴(kuò)增的歷史記錄。
11、完全退出后,按臺(tái)面左下方電源開關(guān),拔出插銷,切斷電源。