PCR反應沒有回收到目的片段需要做什么？

1、涂布未轉化的感受態(tài)細胞，如有菌落，表明氨芐霉素失效，或有氨芐抗性的雜菌污染。

2、轉化完整質粒，計算菌落生長數(shù)，測定轉化效率。轉化率=產生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量，鋪板DNA總量是轉化反應所用的量除以稀釋倍數(shù)。例如將1ul的質粒（1ug/ul）用于100ul感受態(tài)細胞轉化。再將1ul轉化后的感受態(tài)細胞稀釋至1000ul后（含有10ng DNA），用100ul鋪板（含有1ng DNA）。過夜培養(yǎng)后得到了1000個菌落。轉化率=1000菌落數(shù)×103ng/鋪板1ng DNA=106 cfu/ug。低于108cfu/ug，轉化效率低，應重新進行細胞轉化。

3、如用pGEM-T作為陽性對照，產生了超過20-40個藍斑，表明載體失去T?？赡苁沁B接酶污染了核酸酶，需更換核酸酶。