引物設(shè)計的基本原則：

1、  引物長度：15-30 bp，常用為20 bp左右。

2、 引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

3、 引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補序列。

4、兩個引物之間不應(yīng)存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。

5、 引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續(xù)8個堿基在待擴增區(qū)以外不能有完全互補序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴增。

6、引物3‘端的堿基，特別是zui 末及倒數(shù)第個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，選擇是G和C。

7、 引物的5 ′端可以修飾。如附加限制酶位點，引入突變位點，用生物素、熒光物質(zhì)、地高辛標記，加入其它短序列，包括起始密碼子、終止密碼子等。