PCR反應(yīng)過程有以下3個(gè)步驟:
1、變性將反應(yīng)體系混合物加熱到94℃,維持較短時(shí)間(大約15 s-30 s),使目標(biāo)DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,形成單鏈DNA作為反應(yīng)模板。
2、退火將反應(yīng)體系冷卻至特定的溫度(引物的TM值左右或以下),引物與DNA模板的互補(bǔ)區(qū)結(jié)合,形成模板引物復(fù)合物。
3、延伸將反應(yīng)體系的溫度提高到72℃并維持一段時(shí)間,引物在耐熱聚合酶的作用下,以引物為固定起點(diǎn),以4種單核苷酸(dNTP)作為底物合成新的DNA鏈。
以上三步作為一個(gè)循環(huán)重復(fù)的進(jìn)行,每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一循環(huán)的模板。如此循環(huán)數(shù)十次,從而使目的基因得到指數(shù)級(jí)擴(kuò)增,達(dá)到檢測或獲取基因的目的。