分光光度法基本介紹
選擇吸收
分光光度法物質(zhì)與光作用,具有選擇吸收的特性。有色物質(zhì)的顏色是該物質(zhì)與光作用產(chǎn)生的。即有色溶液所呈現(xiàn)的顏色是由于溶液中的物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收所致。由于不同的物質(zhì)其分子結(jié)構(gòu)不同,分光光度法對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收能力也不同,因此具有特征結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)集團(tuán),存在選擇吸收特性的*大實(shí)收波長(zhǎng),形成*大吸收峰,而產(chǎn)生特有的吸收光譜。即使是相同的物質(zhì)由于其含量不同,對(duì)光的吸收程度也不同。利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來鑒別物質(zhì)的存在(定性分析),或利用物質(zhì)對(duì)一定波長(zhǎng)光的吸收程度來測(cè)定物質(zhì)含量(定量分析)的方法,稱為分光光度法。
定量依據(jù)
朗伯一比爾(Lambert - Beer)定律是分光光度法定量分析依據(jù)的基本原理。當(dāng)一束單色光(指路由一種顏色的光)通過一均勻的溶液時(shí),一部分被吸收,一部分透過。設(shè)入射光的強(qiáng)度為I0,透射光強(qiáng)度為I,則I/I0為透光度,用T表示。百分透過率為 T% = (I/I0)x100%
研究表明:溶液對(duì)光的吸收程度即吸光度(A)(又稱消光度E、或光密度D)與透光度(T)呈負(fù)對(duì)數(shù)關(guān)系,即:A = - lgT
朗伯定律:有色溶液的吸光程度(A)與其液層厚度(光程)b成正比。當(dāng)溶液濃度不變時(shí),溶液的液層厚度越大,對(duì)光的吸收程度A值越大,則透光度越小。