服務(wù)描述：

公司提供委托細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)，細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的???染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

發(fā)貨：

客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

保存和應(yīng)用：

客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)  Butachlor solution  質(zhì)量規(guī)格：0.100mg/ml 犬KI-67抗原(MKI67)試劑盒 Dog aigen KI-67,MKI67 ELISA kit

丁草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Butachlor  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,95% 犬N端前腦素(-proBNP)試劑盒 Canine N-terminal pro-brain naiuretic peptide,-proBNP ELISA Kit

丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)  Butachlor solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4% 犬N端前心肽(-ProANP)試劑盒 Dog N-terminal Pro aial naiuretic peptide,-ProANP ELISA kit

丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)  Butachlor solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=7% 犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 Canine N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit

炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)  Buturon  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬P物質(zhì)受體(TACR1)試劑盒 Dog Substance-P receptor,TACR1 ELISA kit

螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)  Bromopropylate solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% 犬P選擇素(SELP)試劑盒 Dog P-selectin,SELP ELISA kit

螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)  Bromopropylate solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=2% 犬S100B蛋白(S100B)試劑盒 Dog S100 calcium binding protein B,S100B ELISA kit

硝醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Bronopol  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)試劑盒 Canine S100 calcium binding protein A12/Calgranulin-C,S100A12 ELISA Kit

氟草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Benfluralin  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α-1/2干擾素(IFN-α1/2)試劑盒 Canine Ierferon alpha-1/2 ELISA kit

苯并(k)熒蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)  Benzo(k)fluoranthene  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α1微球蛋白(α1-MG)試劑盒 Canine α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit
體直腸癌組織提取物【Cancer: Human Rectum Cancer Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg

體脂肪組織提取物【Fat: Normal Human Adipose Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg

體胃癌組織源細(xì)胞提取物【Human Cancer: Gastric Cancer Tissues Cells Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
1174018-99-5  Relebactam  50mg  Besnoitia besnoiti貝氏貝諾孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1174018-99-5  Relebactam  5mg  Porcine Hemagglultinating Encephalomyelitis Virus(PHEV)豬血凝性腦脊髓炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1174043-16-3  AZD2461  100mg  Piscirickettsia salmonis鮭魚立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1174043-16-3  AZD2461  10mg  Turkey Hemorrhagic Enteritis Virus(TuHEV)火雞出血性腸炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1174043-16-3  AZD2461  10mM(in1mLDMSO)  Turkey Hemorrhagic Enteritis Virus(TuHEV)火雞出血性腸炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒  動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒
注意事項：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.ZJU-0430 細(xì)胞用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

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