細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱
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NCTC1469(NCTC CLONE 1469)細(xì)胞
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規(guī)格
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詳見說明書
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貨號
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BJ-99481
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服務(wù)描述:
公司提供委托細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù),細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
人蛋酸酶2(2A),催化亞基,β亞型(PPP2CB)試劑盒 Human
PPP2CB ELISA kit 吉拉德試劑 P(>95.0%(T)) Girard's Reagent P 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T)
RatParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit大鼠甲狀旁腺相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量:23.50-24.30
%)
4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione 質(zhì)量規(guī)格:含氮量:23.50-24.30 %
GMS10電擊感受態(tài)轉(zhuǎn)化試劑盒10 N-叔丁基-α-苯基硝酮(>98.0%(HPLC)(T)) N-tert-Butyl-α-phenylnitrone 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
MouseSolubleprotein-100,S-100ELISA試劑盒小鼠S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 16-DOXYL-硬脂酸自由基(>95.0%(HPLC)(T)) 16-DOXYL-stearic Acid Free Radical 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T)
小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒 ,英文名: sP-selectin ELISA Kit CLA
(>98.0%(HPLC)) CLA 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
大鼠維生素E(VE)ELISA檢測試劑盒RatVitaminE,VEELISAKit
96T/48T MCLA (>98.0%(HPLC)) MCLA 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
人蛋酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)試劑盒 Human protein phosphatase 1
regulatory subunit A,PPP1R1A ELISA Kit FCLA 自由酸[化學(xué)發(fā)光試劑] FCLA Free Acid 質(zhì)量規(guī)格:化學(xué)發(fā)光試劑
RatParathyroidhormone,PTHELISAKit大鼠甲狀旁腺(PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 紅-CLA(含氮量:9.00-10.30
%) Red-CLA 質(zhì)量規(guī)格:含氮量:9.00-10.30 %
GMS10甲基化基因電轉(zhuǎn)感受態(tài)5X100微升 異魯米諾(>98.0%(HPLC)(T)) Isoluminol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
MousesolubleP-selectin,sP-selectinELISA試劑盒小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 草酸雙[2,4,5-三氯-6-(戊氧羰基)苯基]酯(>98.0%(HPLC))
Bis[3,4,6-trichloro-2-(pentyloxycarbonyl)phenyl] Oxalate 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
1228078-65-6
PAR-4 Agonist Peptide, amide TFA (PAR-4-AP (TFA)) 10mg
Sphaeropsis tumefaciens柑橘枝瘤病菌PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1228078-65-6 PAR-4
Agonist Peptide, amide TFA (PAR-4-AP (TFA))
1mg Spiroplasma citri柑橘頑固病螺原體PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1228078-65-6 PAR-4
Agonist Peptide, amide TFA (PAR-4-AP (TFA))
5mg Spiroplasma citri柑橘頑固病螺原體PCR試劑盒 NCTC1469(NCTC CLONE 1469)細(xì)胞植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1228105-51-8 SMCC-DM1
(DM1-SMCC) 100mg Sowbane Mosaic Virus(SoMV)藜草花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1228105-51-8 SMCC-DM1
(DM1-SMCC) 10mg Sphaeropsis pyriputrescens蘋果球殼孢腐爛病菌PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
PrimaCell?甲狀腺癌組織源細(xì)胞試劑盒實驗 規(guī)格6次/盒
PrimaCell?乳腺癌組織源細(xì)胞試劑盒說明書 規(guī)格6次/盒
PrimaCell?肺癌組織源細(xì)胞試劑盒培養(yǎng) 規(guī)格6次/盒
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