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志賀氏菌檢驗(yàn)技術(shù)
志 賀 菌 的 病 原 學(xué) 與 實(shí) 驗(yàn) 室
診 斷
前 言
志賀菌的細(xì)菌又稱痢疾桿菌，是腸桿菌中的一群*常見的引起細(xì)菌性痢疾的病原菌，對嬰幼兒可引起急性中毒性菌痢，死亡率高。
菌痢一年四季均可發(fā)病, 但有明顯的季節(jié)性，以夏秋季發(fā)病率*高, 在我國福氏和宋內(nèi)氏痢疾桿菌引起的痢疾較為常見。在新疆甲、乙類傳染病報(bào)告中發(fā)病率占居首位。
一、病 原 學(xué)
生物學(xué)特性：
形態(tài)與染色
培養(yǎng)特性
生化特性
抗原特性
致病性
抵抗力
1、 形態(tài)與染色
本菌為革蘭氏陰性桿菌，菌
體短小約為2 ～ 3×0.5 ～0.7um、
無鞭毛、不產(chǎn)生芽胞、無莢膜、
無動(dòng)力、某些菌型有菌毛，易附
著在腸黏膜上皮細(xì)胞上。
2、培養(yǎng)特性： 本屬細(xì)菌為需氧或兼性***，*適
生長溫度為37℃，*適PH值為7.2～7.4，
營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基均可生長。
在液體培養(yǎng)基中呈均勻混濁生長，不形成
菌膜及沉淀。在麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊
脂、SS瓊脂上生長良好，經(jīng)35～37℃培養(yǎng)
18～24h，可形成直徑為2mm，圓形稍凸起、
無色透明或半透明、光滑邊緣整齊的菌落。
但宋內(nèi)氏痢疾桿菌容易形成粗糙型菌落，
菌落較大，邊緣不整齊。
3、生化特性
表1 志賀氏菌屬的生化反應(yīng)
實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 反 應(yīng) + ％
葡萄糖產(chǎn)酸 + 100.0
葡萄糖產(chǎn)氣 - 12.1
乳糖 - 0.3
蔗糖 - 0.9
甘露醇 +/ - 80.5
衛(wèi)予醇 -/+ 5.4
水楊苷 - 0
H2S - 0
尿素酶 - 0
丙二酸鹽 - 0
靛基質(zhì) d 37.8
甲基紅 + 100.0
VP - 0
構(gòu)櫞酸鹽 - 0
葡糖糖酸鹽 - 0
明膠酶 - 0
苯丙氨酸脫氨酶 - 0
賴氨酸脫氨酶 - 0
鳥氨酸酶 -/+ 20.0
精氨酸雙水解酶 -/+ 7.6
4、抗原特性:
志賀菌的抗原結(jié)構(gòu)是由菌體（O）
抗原，表面（K）抗原和菌毛抗原組
成，志賀菌沒有鞭毛,故沒有H抗（K）
抗原不耐熱,加熱100℃1h即可破壞。
菌體抗原為多糖復(fù)合物,具有特異性。
它分為兩種： 型特異性抗原
群特異性抗原
表2: 各群血清型分布表
血清型
A群 痢疾志賀菌 12
B群 福氏志賀菌 16
C 群 鮑氏志賀菌 18
D群 宋內(nèi) 志賀菌 1
5、致病性：
痢疾桿菌有強(qiáng)烈的內(nèi)**、痢疾桿
菌還能產(chǎn)生外**引起神經(jīng)麻痹現(xiàn)象。
當(dāng)痢疾桿菌隨食物進(jìn)入小腸內(nèi),在結(jié)腸
和直腸粘膜上大量繁殖,釋放**,使
腸粘膜充血、水腫、壞死形成潰瘍出
現(xiàn)膿血便、腹瀉、**里急后重和全
身中毒癥狀。
6、抵抗力
志賀菌在外界抵抗力較弱
冰塊中可生存數(shù)月，
在10～37℃的水中可以生存數(shù)天，
在水果、蔬菜及病人接觸過的物品上
能存活數(shù)周。
本菌對一般化學(xué)**劑均敏感。
二．實(shí)驗(yàn)室診斷
實(shí)驗(yàn)室診斷包括：樣品的處理
檢驗(yàn)方法
生化試驗(yàn)
血清學(xué)試驗(yàn)
挑選菌落：
選擇菌落時(shí)、應(yīng)挑選中等大小、
圓形、光滑、無色透明、不發(fā)酵乳糖
的菌落。挑選菌落時(shí)應(yīng)在每個(gè)平板上
挑取2～5個(gè)單個(gè)菌落穿種三糖鐵尿素
半固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)后觀察結(jié)果，
一般培養(yǎng)18h為*佳。
志賀菌在三糖培養(yǎng)基上的生化反應(yīng)（見表4）
三、血清學(xué)鑒定
首先用志賀氏四種多價(jià)血清（A1、
A2、F、宋內(nèi)）進(jìn)行玻凝。
四種多價(jià)不凝集時(shí)，則考慮用鮑氏
多價(jià)血清(C1-5、C6-10、C11-14、C15-
18)逐一做玻凝。
如不凝集，可再選志賀氏多價(jià)血清：
(A1-4、A5-8、A9-12),如以上血清均不
凝集，即可排除志賀氏菌。
福氏痢疾桿菌抗原結(jié)構(gòu)表（表5）
菌 型 抗 原 型 群 抗 原
1a Ⅰ 3、4
1b Ⅰ 3、4、6
1c Ⅰ 7
2a Ⅱ 3、4
2b Ⅱ 7
3a Ⅲ 6、7
3b Ⅲ 3、4、6
3c Ⅲ 6
4a Ⅳ （3、4）
4b Ⅳ 6
4c Ⅳ 3、4、6、7
5a Ⅴ 4
5b Ⅴ 7
6* Ⅵ （3、4）
X — 7
Y — 3、4
福氏志賀菌的血清鑒定（表6）
報(bào)告結(jié)果：
凡鏡檢為G-桿菌
符合志賀氏菌的生化反應(yīng)
血清凝集陽性者、即可判定菌
型并出據(jù)報(bào)告。
對可疑菌株應(yīng)上送上級部門進(jìn)
行確認(rèn)。
對確診菌株接種半固體培養(yǎng)基
內(nèi)保存。保存期限至少為3個(gè)月。
鑒別診斷：
下述培養(yǎng)物可以棄去。
1、在選擇性瓊脂平板上呈蔓延生
長的培養(yǎng)物。
2、在18～24h內(nèi)發(fā)酵乳糖，蔗糖
的培養(yǎng)物。
3、三糖反應(yīng)不符合的培養(yǎng)物。
說明及注意事項(xiàng)：
三糖鐵尿素半固體為三糖鐵瓊脂
與尿素半固體兩者合并的復(fù)合培養(yǎng)物，
可以同時(shí)測定葡萄糖、乳糖、蔗糖的
發(fā)酵、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣情況，并觀察H2S
的生成，尿素分解和動(dòng)力；斜面上的
菌苔可做玻片凝集試驗(yàn)。
三糖鐵尿素半固體培養(yǎng)基用于腸
道菌的鑒別，效果良好。
由于分解葡萄糖后產(chǎn)酸使PH降低，
中層及斜面變黃。同時(shí)又因?yàn)榧?xì)菌利
用蛋白胨后產(chǎn)生的代謝物，在斜面微
氧環(huán)境下產(chǎn)堿使斜面變紅，而中層保
持厭氧狀態(tài)，不易氧化及揮發(fā)。仍為
黃色。
尿素加熱過高，過久可使尿素酶
分解變紅；如加熱不足又可造成**
不徹底。因此關(guān)鍵問題是準(zhǔn)確控制滅
菌溫度及其加熱時(shí)間。
克氏鐵瓊脂與三糖鐵瓊脂的主
要區(qū)別在于后者加蔗糖可以排除一
些發(fā)酵蔗糖的非致病性腸道桿菌科
細(xì)菌，兩者主要用于初步鑒別腸桿
菌科的細(xì)菌。
復(fù)習(xí)題：
1、志賀菌屬分幾個(gè)群，各群有多少個(gè)血清型？
2、志賀菌屬在三糖鐵尿素半固體瓊脂斜面上的生化反應(yīng)是什么？
3、志賀菌四種多價(jià)血清指哪幾種？
謝謝！