原位雜交是在研究DNA分子復(fù)制原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)。其基本原理是利用兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能通過氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用放射自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細(xì)胞的功能表達及其調(diào)節(jié)機制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達和基因組進化的研究; ②感染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、巨細(xì)胞病毒DNA的檢測; ③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測; ④基因在染色體上的定位; ⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等; ⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測定等。
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