一、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑配制要求：

PCR擴(kuò)增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的負(fù)壓工作臺(tái)或超凈工作臺(tái)進(jìn)行配制和分裝，所有的吸頭和加樣器都需固定放于其中，吸頭不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其它來源DNA：

1、PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;

2、引物和d-NTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)配制;

3、引物和d-NTP應(yīng)分裝儲(chǔ)存，分裝時(shí)應(yīng)標(biāo)明分裝時(shí)間，以備發(fā)生污染時(shí)及時(shí)查找原因和追溯污染源頭;

二、PCR實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

如果操作不規(guī)范，樣品間的交叉污染是很容易出現(xiàn)的，從而產(chǎn)生假陽性問題。因此，不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)時(shí)要謹(jǐn)慎對待，在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)謹(jǐn)慎操作，一般需做到以下幾點(diǎn)：

1、戴一次性手套，若不小心濺上反應(yīng)液，應(yīng)立即更換手套;

2、避免反應(yīng)液飛濺，若不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;

3、使用一次性吸頭，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時(shí)間暴露于空氣中，避免空氣中氣溶膠的污染;

4、操作多份樣品時(shí)，制備反應(yīng)混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后再分裝，這樣既可以減少操作次數(shù)，避免污染，又可以增加反應(yīng)的度；

5、加入反應(yīng)模板，加入后蓋緊反應(yīng)管;

6、操作時(shí)設(shè)立空白對照和陰陽性對照，既可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性;

7、由于實(shí)際操作時(shí)加樣器很容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染，所以操作者好使用高壓處理過的或可替換的加樣器。假如沒有這種特殊的加樣器，至少在PCR操作過程中加樣器應(yīng)該專用，嚴(yán)禁交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)相鄰區(qū)域使用;

8、重復(fù)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證結(jié)果，慎下結(jié)論。

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