試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析室的順序，依次來(lái)說(shuō)說(shuō)哪些問(wèn)題需要重點(diǎn)盯防。
試劑配制區(qū)
試劑配置區(qū)，看上去很簡(jiǎn)單，操作也很重復(fù)。如果在試劑配制階段，就產(chǎn)生污染的話(huà)，預(yù)示著實(shí)驗(yàn)員將完整地浪費(fèi)一次實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
所以，在試劑配置區(qū)，移液工具和溶液都要定期**。
槍頭要及時(shí)更換
試劑管的蓋子要及時(shí)蓋上
不管有沒(méi)有可疑的污染源，在試劑配置區(qū)，都要定期檢查污染情況，這樣才能及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題所在。
核酸提取區(qū)
實(shí)驗(yàn)員常用的核酸提取，就是用商品化核酸提取試劑盒來(lái)手工提取。而且在這個(gè)過(guò)程中，要涉及到多次加液、轉(zhuǎn)移、離心操作，可謂是雷點(diǎn)重重。
在核酸提取中，試劑通常會(huì)存在有機(jī)組分，會(huì)產(chǎn)生漏液滴液現(xiàn)象。
而離心過(guò)程中，樣品里的**、細(xì)胞、血液之流，還有可能隨著離心機(jī)，變成氣溶膠，在空氣中四處飄蕩，威脅著生物民工的生命**。
當(dāng)實(shí)驗(yàn)室充滿(mǎn)了危險(xiǎn)物質(zhì)和污染源的時(shí)候，大咖選擇另開(kāi)一個(gè)樓層，重建一個(gè)實(shí)驗(yàn)室。而普通實(shí)驗(yàn)員該怎么做呢？
加液和移液時(shí)
升級(jí)移液技術(shù)，就能有效地防止在加液和移液時(shí)，發(fā)生滴液、漏液，進(jìn)而污染工作臺(tái)和其他樣本。比如移取含揮發(fā)性有機(jī)溶液的試劑時(shí)，我們可以進(jìn)行預(yù)潤(rùn)洗或者更換適配性好的吸頭。
另外，把移液器換成分液器能顯著地改善滴液漏液的情況。
離心時(shí)
當(dāng)小心翼翼地安置好試劑，等待離心結(jié)束，期待滿(mǎn)滿(mǎn)地打開(kāi)離心機(jī)蓋子的時(shí)候，卻發(fā)現(xiàn)一個(gè)破碎的離心管，整個(gè)畫(huà)面真是令人心碎。
離心管破碎，免不了又開(kāi)始洗洗洗
因此離心的時(shí)候，還是要選擇質(zhì)量可靠的離心管。
而藏污納垢重災(zāi)區(qū)之一——離心機(jī)的轉(zhuǎn)子和吊籃，也要選擇便于高溫****的那種，這樣，就可以節(jié)約很多**清潔的時(shí)間啦。
實(shí)驗(yàn)全程控制
在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，增加空白提取對(duì)照或陰性樣本提取對(duì)照，對(duì)核酸提取過(guò)程和實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行控制。
核酸擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)
這兩個(gè)區(qū)域涉及 PCR 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備、運(yùn)行以及 PCR 產(chǎn)物的分析。PCR 實(shí)驗(yàn)因?yàn)槭置舾卸鴤涫軞g迎，不過(guò)這個(gè)敏感的優(yōu)勢(shì)，也同樣放大了污染。極其微量的污染，就可能反手摔一個(gè)假陽(yáng)性結(jié)果給你。
而且 PCR 實(shí)驗(yàn)中，運(yùn)行中的電泳池附近，會(huì)有大量 DNA 擴(kuò)散，一旦出現(xiàn)氣溶膠污染，就真是又要關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室了。
在這個(gè)區(qū)域當(dāng)中，主要的污染集中在 3 個(gè)地方：
模板間交叉污染：
主要是在取樣加樣的過(guò)程中，由于移液器之間的交叉形成的污染。
移液器所造成的污染，如果是表面的話(huà)可以經(jīng)常使用 70% 的酒精進(jìn)行擦拭，而內(nèi)部造成的污染，因?yàn)?*清潔比較困難，所以選用集吸液放液脫卸吸頭于一鍵的移液器。
吸頭中的濾芯，也能夠阻止氣溶膠擴(kuò)散，防止污染的產(chǎn)生.
PCR 試劑的污染：
主要是在 PCR 組分試劑加樣過(guò)程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。
加樣過(guò)程中，因?yàn)?PCR 試劑對(duì)溫度十分敏感，需要通過(guò)冰浴使得 PCR 試劑和 PCR 板/管處于 0℃，但這個(gè)過(guò)程也是充滿(mǎn)了污染的風(fēng)險(xiǎn)的。
而改用 PCR-Cooler 低溫指示冰盒和 IsoTherm-System 冰盒系統(tǒng)，就可以不用再通過(guò)冰浴避免污染風(fēng)險(xiǎn)，樣品和試劑的**了。
PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物污染：
這是 PCR 反應(yīng)中主要常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)?PCR 產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 PCR 檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。
每一項(xiàng)準(zhǔn)備工作沒(méi)有做好，都會(huì)影響到擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)，因此，想要順利地出結(jié)果，文中提到的注意點(diǎn)，都要小心謹(jǐn)慎地對(duì)待。
另外，降低 PCR 實(shí)驗(yàn)的頻率也能降低被污染的風(fēng)險(xiǎn)。能一次做 50 個(gè)，不要分開(kāi) 5 次每次做 10 個(gè)。不用頻繁做 PCR 實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也更好看。
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