**類是皮下移植瘤動物模型

顧名思義，這種模型的建立是將腫瘤細胞或腫瘤組織直接種植在小鼠的皮下。種植的點也有講究，一般選擇血運**回流豐富的腹股溝和腋窩?？筛鶕?jù)實驗設計選擇移植點，統(tǒng)一移植點的位置，除了遵守實驗統(tǒng)一的條件外，待腫瘤成熟后收集腫瘤時留下照片證據(jù)也顯得美觀。

裸鼠（Balb/c 鼠， 無毛發(fā)， T **細胞缺陷）是比較常見和常用的實驗用鼠，尤其是在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的優(yōu)點。當然，這種腫瘤模型也有缺陷，即不能很準確的模擬正常人體腫瘤發(fā)**展的過程。

腫瘤細胞移植時的簡要步驟

首先準備好要移植的腫瘤細胞（細胞量根據(jù)不同腫瘤略有不同，我們所用的前列腺癌細胞系每個移植點一般選擇 1x106 左右；腫瘤細胞可與基質(zhì)膠 1:1 混勻后用 1 ml 注射器吸取，基質(zhì)膠能夠給腫瘤細胞提供營養(yǎng)環(huán)境，有助于腫瘤細胞生長）。

戴無菌手套后，將小鼠用左手大拇指和食指捏住頸部皮膚，然后將鼠尾用左手無名指和小指固定于左手大魚際。將腋窩或腹股溝用 75% 酒精** 3 次。右手持吸有腫瘤細胞和基質(zhì)膠混合液的注射器，在腹股溝或腋窩的位置，45 度斜角進針，注意不要突破腹膜，將針頭保持于皮下位置。

然后近水平位置將針頭幾乎完全插入皮下，將混有基質(zhì)膠的腫瘤細胞注射入皮下（腫瘤細胞量約 1x106），快速退針，左手食指輕壓針孔約 1 min 后將小鼠放回飼養(yǎng)籠中，注意將小鼠側放于墊料上，放置其不適嘔吐時嘔吐物誤入呼吸道引起窒息。2～3 h 后觀察小鼠是否蘇醒。

如果是利用腫瘤組織（人體腫瘤標本或小鼠移植瘤傳代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，則需要首先將腫瘤組織用無菌 PBS（或 1640 培養(yǎng)基）洗滌 3 次，然后在無菌平皿上切成或用無菌剪刀剪成<1 mm3 體積的小塊（種植前可裹基質(zhì)膠）備用。

將小鼠用水合氯醛麻醉后平臥于解剖板上，四肢用膠帶固定，將腋窩或腹股溝用 75% 酒精** 3 次，然后用眼科剪剪開約 0.5 cm 小口，小鑷子將皮下筋膜與皮膚分開，然后將腫瘤組織放入貼近腹股溝或腋窩的深部，每個位置放置 2～3 塊腫瘤組織，注意不同組間統(tǒng)一放置腫瘤組織塊數(shù)以保持一致。

然后縫合皮膚，**后將小鼠側臥位放置于飼養(yǎng)籠的墊料上。2～3 h 后觀察小鼠是否蘇醒。

影響皮下移植瘤腫瘤形成因素

1. 移植腫瘤細胞的生長狀態(tài)：腫瘤細胞應選取傳代后匯合度達 60%～80% 為理想狀態(tài)，此時細胞生長進入對數(shù)期，生長速度快，狀態(tài)理想，易于形成移植瘤。

2. 腫瘤細胞收集后種植到小鼠皮下不宜時間過長，應盡快種植到小鼠體內(nèi)，我們一般在 2 h 內(nèi)完成。

3. 裹有基質(zhì)膠的腫瘤細胞種植比單純的腫瘤細胞種植更易成瘤?；|(zhì)膠為腫瘤細胞在接受宿主營養(yǎng)之前提供充足營養(yǎng)環(huán)境，起到橋梁的作用。

4. 腫瘤組織移植種植時，應將腫瘤組織切成 1 mm3 的小塊，過小或過大均不利于腫瘤形成，組織塊過大時不利于腫瘤組織中的腫瘤細胞接觸新的環(huán)境生長，組織塊過小時則腫瘤細胞過少，大部分在切塊時破壞，均不利于腫瘤形成。

另外從腫瘤組織離體到種植到小鼠皮下不宜時間過長，我們一般在 4 h 內(nèi)完成移植種植。

02**類是腎被膜下移植瘤動物模型

腎被膜下血運較為豐富，比較適合那些對腫瘤營養(yǎng)環(huán)境要求苛刻的腫瘤細胞。

用于腎被膜下移植瘤的小鼠主要是 NOD-D 鼠（D 鼠與非肥胖糖尿病鼠（nonobese diabetic,NOD）雜交而來，T 和 B **細胞、抗原呈遞細胞、循環(huán)組分及部分 NK 細胞缺陷），這種小鼠表型為白色毛發(fā)小鼠，對于飼養(yǎng)條件較為苛刻，需要無菌的 SPF 級飼養(yǎng)環(huán)境。

不易成瘤的腫瘤組織一般選擇腫瘤腎被膜下種植移植瘤模型。建立模型時，同樣首先需要將腫瘤組織用無菌 PBS（或 1640 培養(yǎng)基）洗滌 3 次，然后在無菌平皿上切成或用無菌剪刀剪成<1 mm3 體積的小塊（種植前可裹基質(zhì)膠）。

將小鼠用水合氯醛麻醉后俯臥于解剖板上，四肢用膠帶固定，在肋脊角靠下的位置剪去約 1.5 cm 直徑的皮膚毛發(fā)以備皮。75% 酒精** 3 次，用眼科剪將皮膚剪開約 0.5 cm 小口，依次分離皮膚、皮下、側腹膜。

找到腎臟位置，小心仔細將腎臟提至皮膚切口出，用小尖鑷子戳開腎被膜一小口，仔細將小塊腫瘤組織送入腎被膜下，一般 2～3 塊。然后將腎臟送回腹腔，依次縫合腹膜、皮下組織和皮膚。**后將小鼠放回飼養(yǎng)籠內(nèi)。2～3 h 后觀察是否蘇醒。

影響腎被膜下移植瘤腫瘤動物模型形成因素

1. 腫瘤組織處理是否恰當，除和皮下移植瘤相同處理外，應注意多裹些基質(zhì)膠在腫瘤組織小塊上，在塞進腎被膜下時應盡量注意盡量保持腎被膜完整。我們曾單純將腫瘤組織種植到腎被膜下，成瘤率較低，而裹有基質(zhì)膠的腫瘤組織較易成瘤。

2. 注意手術時及時找到出血點并及時止血，側腹膜解剖時損傷，誤傷腎臟、腎臟血管等，如不及時處理，很容易引起出血過多導致失血性休克。尤其是陰性出血不易察覺，在**天查看小鼠情況時發(fā)現(xiàn)小鼠已死亡等。

3. 手術器械需****，操作臺需要無菌環(huán)境，避免因感染引起術后小鼠死亡。

03第三類是原位移植瘤動物模型

為了更好的模擬腫瘤的生長情況選擇發(fā)生腫瘤的器官為移植點。常用的小鼠仍為 NOD-D 鼠。采取開放手術打開暴露相應的發(fā)生腫瘤的對應的小鼠器官，將腫瘤組織或腫瘤細胞種植到器官內(nèi)。此方式因不易操作，且小鼠手術后死亡率較高，一般不常選用。

小鼠實驗分組一般 5 只以上為一組，分別設置實驗組和對照組。術前將小鼠于動物房飼養(yǎng)一周適應環(huán)境，術前術后稱量記錄體重。小鼠移植瘤一般 2 w 左右即可形成，可用游標卡尺記錄瘤體長短徑，每周 3 次記錄。一般待瘤體體積為 1 cmx1 cm 時處死小鼠，收集腫瘤接著在小鼠身上傳代處理或進行其他實驗驗證。

小鼠實驗腫瘤動物模型構建關鍵要細心，尤其是腫瘤細胞選擇，腫瘤組織塊處理上要仔細認真，這是影響模型成功建立的關鍵，還有移植手術時更要耐心細致，不要還沒有建立就已經(jīng)失敗。

****、****、****、****  ***********！