RNAi知多少
隨著RNAi現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)和研究到microRNA 成為全球生物研究者關(guān)注的熱點(diǎn)，與其相關(guān)的各種概念不斷刷新我們的認(rèn)識(shí)，siRNA、shRNA、microRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、microRNA mimic、microRNA inhibitor 、agomir、antagomir，各種RNA讓剛剛接觸RNAi的人頭昏腦漲，那么，現(xiàn)在讓我?guī)Т蠹艺J(rèn)識(shí)一下他們各自有什么特點(diǎn)，有什么關(guān)系。
siRNA是dsRNA在Dicer酶作用下裂解成21-25個(gè)核苷酸的小干擾RNA，化學(xué)合成的siRNA一般正義鏈和反義鏈都是21個(gè)堿基，正義鏈?zhǔn)?9個(gè)堿基的靶序列加3‘端TT懸頭，反義鏈?zhǔn)?9與正義鏈互補(bǔ)的堿基加3‘端TT懸頭
shRNA即short hairpin RNA，shRNA表達(dá)載體在polIII啟動(dòng)子控制下轉(zhuǎn)錄的短發(fā)夾RNA，包括兩個(gè)短反向重復(fù)序列，中間由一莖環(huán)（loop）序列分隔的，組成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，3‘端有UU懸頭，一個(gè)已知有效的siRNA序列如果需要較長一段時(shí)間內(nèi)維持沉默效應(yīng)，則shRNA系統(tǒng)是更優(yōu)選擇。
成熟的miRNA是由較長的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物經(jīng)過一系列核酸酶的剪切加工而產(chǎn)生的，初級(jí)轉(zhuǎn)錄物稱為pri-miRNA。pri-miRNA長度從幾百到幾千個(gè)堿基不等，帶有5‘帽子和3’polyA尾巴，以及1到數(shù)個(gè)發(fā)夾徑環(huán)結(jié)構(gòu)。Pri-miRNA經(jīng)剪切產(chǎn)生約70個(gè)堿基的miRNA前體，即pre-miRNA。pre-miRNA為單一發(fā)夾結(jié)構(gòu)，5‘帶有磷酸基團(tuán)，3’有兩個(gè)突出堿基，并帶有3’羥基。pre-miRNA經(jīng)進(jìn)一步剪切，形成長度約為22個(gè)堿基的單鏈成熟 miRNA。
microRNA mimic是模擬活體microRNA活性來能增強(qiáng)內(nèi)源性miRNA的功能的microRNA模擬物，化學(xué)合成有單鏈的也有雙鏈的。
microRNA Inhibitor是化學(xué)合成的成熟miRNA互補(bǔ)單鏈，用來抑制內(nèi)源性的microRNA的功能。特異的microRNA inhibitor能夠被導(dǎo)入到表達(dá)特異的microRNA的細(xì)胞內(nèi)，抑制microRNA的作用，也可以用來抑制表達(dá)特異的內(nèi)源性的miRNA的報(bào)告載體的表達(dá)。
Agomir（microRNA激動(dòng)劑）是經(jīng)過特殊標(biāo)記和化學(xué)修飾的雙鏈小RNA,通過模擬內(nèi)源性的microRNA來調(diào)節(jié)靶基因的生物學(xué)功能
antagomir是根據(jù)microRNA成熟體序列設(shè)計(jì)，經(jīng)過特殊標(biāo)記與化學(xué)修飾的單鏈小RNA,是專門用于抑制內(nèi)源性microRNA的高效阻斷劑。
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