通常MTT試劑濃度為5mg/ml。因此,可以稱取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸緩沖液(PBS)或無酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的**,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過程中,容器好用鋁箔紙包住。
需要注意的是,MTT法只能用來檢測細胞相對數(shù)和相對活力,但不能測定細胞數(shù)。在用酶標儀檢測結果的時候,為了實驗結果的線性,MTT 吸光度好在0-0.7 范圍內(nèi)。
MTT試劑一般好現(xiàn)用現(xiàn)配,過濾后4℃避光保存兩周內(nèi)有效,或配制成5mg/ml保存在-20度長期保存,避免反復凍融,好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里,用的時候現(xiàn)配,直接往培養(yǎng)板中加,沒必要一下子配那么多,尤其當MTT變?yōu)榛揖G色時就不能再用了。
MTT試劑有致癌性,用的時候小心,有條件好帶那種透明的簿膜手套。配成的MTT需要無菌,MTT對菌很敏感;往96孔板加時不避光也沒有關系,畢竟時間較短,或者你不放心的時候可以把操作臺上的照明燈關掉。配制MTT時用用PBS溶解,也有人用生理鹽水配,60℃水浴助溶。
PBS配制方法:Nacl 8g、Kcl 0.2g、Na2HPO4 1.44g、KH2PO4 0.24g,調(diào)pH 7.4,定容1L。