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技術(shù)**

定量蛋白質(zhì)組學(xué)iTRAQ

定量蛋白質(zhì)組學(xué)iTRAQ 
Lable-free與iTRAQ
復(fù)雜的蛋白樣品經(jīng)過酶解形成肽段，再經(jīng)過廣泛分級，由自動化的串聯(lián)質(zhì)譜鑒定。差異蛋白質(zhì)的定量研究是基于肽段水平而非完整的蛋白質(zhì)，成為該工藝大的工藝特色，該工藝實(shí)現(xiàn)了樣品分離與鑒定直接聯(lián)合，自動化操作，可以用于各種蛋白質(zhì)混合物的蛋白質(zhì)組學(xué)分析，如血清、組織、各種體液以及尿液等。非標(biāo)記定量工藝在定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中受到了眾多科學(xué)工作者的推崇。
【優(yōu)點(diǎn)：信息量大，樣本量低，檢測低豐度蛋白更多，較于定量】
同位素標(biāo)記較于和定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)工藝是一種新的、功能強(qiáng)大的可同時對四種樣品進(jìn)行和較于定量研究的方法。iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側(cè)鏈連接的胺標(biāo)記同重元素(isobaric)。在質(zhì)譜圖中，一種iTRAQ試劑標(biāo)記的不同樣本中的同一蛋白質(zhì)表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。而在串聯(lián)質(zhì)譜中，信號離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比(114～117)的峰，因此，根據(jù)波峰的高度及面積，可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。
【優(yōu)點(diǎn)：定量更準(zhǔn)，信息量較于少】
lable-free 實(shí)驗(yàn)流程： 
1、 樣本提取蛋白；
2、 胰蛋白酶消化蛋白；
3、 LC-MS/MS質(zhì)譜檢測及分析
iTRAQ 實(shí)驗(yàn)流程： 
1、 樣本還原、變性、半胱氨酸封閉；
2、 胰蛋白酶消化蛋白；
3、 消化蛋白的iTRAQ試劑標(biāo)記；
4、 混合標(biāo)記蛋白到同一個試管內(nèi)；
5、 LC-MS/MS質(zhì)譜檢測及分析；
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