產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
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產(chǎn)品名稱
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甲型流感病毒檢測(cè)試劑盒
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規(guī)格
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50T
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貨號(hào)
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FS-01P99006
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操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
產(chǎn)品組成:
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成分
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規(guī)格
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溶液A
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13ml
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溶液B
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13ml
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溶液C
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18ml
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離心吸附柱
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50套
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通用洗柱液
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50ml
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DNA洗脫液
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10ml
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說明書
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1份
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下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
果菜抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次白頭翁皂苷 B4
食物抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次灰氈毛忍冬皂苷乙
酒類抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次人參
飲料抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次杜仲
飲料抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次D-蘇氨酸
果菜L-天門冬酰胺化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次2-氨基異丁酸
烘賠食物L-天門冬酰胺化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次DL-2-氨基丁酸
營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑L-天門冬酰胺化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次凝血酶
細(xì)胞培養(yǎng)基L-天門冬酰胺化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次聚乙二醇1500
果菜L-天門冬酰胺酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次無水碳酸鈉
烘賠食物L-天門冬酰胺酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次原兒茶醛
營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑L-天門冬酰胺酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯
細(xì)胞培養(yǎng)基L-天門冬酰胺酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次甜葉菊
飲料糖精比色法定量檢測(cè)試劑盒20次磷酸咯萘啶
糖果糖精比色法定量檢測(cè)試劑盒20次L-正亮氨酸
甲型流感病毒檢測(cè)試劑盒cofilin/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠絲切蛋白抗體IgGD-胱氨酸 98%
Phospho-Cofilin (Ser3) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化絲切蛋白抗體IgG順式六氫苯酐 99%
Cortactin/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG順-5-降烯-外型-2,3-二甲酸酐 95%
Cortactin (phospho Tyr466) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG5,5'-二溴-2,2'-聯(lián)噻吩 99%
COLEC12/CL-P1/FITC 熒光素標(biāo)記凝集胎盤蛋白1抗體IgG2,3-二溴噻吩 98%
Glycodelin A/PP14/FITC 熒光素標(biāo)記胎盤蛋白14抗體IgG2,5-二溴-3-己基噻吩 97%
Clusterin- Alpha/ Beta /FITC 熒光素標(biāo)記凝聚素α/β抗體IgG2,5-二溴-3-辛基噻吩 96%
C-Myc/HRP (MYC/MTLC) 辣根過氧化物酶標(biāo)記致癌基因C-Myc抗體IgG2,5-二溴-3,4-二硝基噻吩 98%
使用方法:
一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細(xì)胞預(yù)處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預(yù)處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取
5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉???漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。
13. 重復(fù)上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
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