產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

細胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光定量檢測試劑盒20次伏（液體）鹽酸帕羅西汀

組織血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光定量檢測試劑盒20次溶菌酶西洛他唑

血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光定量檢測試劑盒20次美藍（基藍）L-那格列奈

體液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光定量檢測試劑盒20次水楊素齊多夫定雜質(zhì)B

細胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法（FRET）定量檢測試劑盒20次MiddleBrook 7H10 瓊脂氟伐他汀鈉

組織血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法（FRET）定量檢測試劑盒20次MiddleBrook 7H11 瓊脂萘磺酸

血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法（FRET）定量檢測試劑盒20次氣單胞菌鑒別瓊脂 沙苑子LAMP鑒定試劑盒

體液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法（FRET）定量檢測試劑盒20次精氨酸肉湯蜈蚣探針法PCR鑒定試劑盒

細胞人類巨細胞病毒蛋白酶（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法20次曲霉素瓊脂基礎(chǔ)(AFPA)人激肽釋放酶6(KLK 6)Elisa測定試劑盒

定量檢測試劑盒假單胞分離瓊脂豬苓染料法PCR鑒定試劑盒

組織人類巨細胞病毒蛋白酶（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法20次假單胞分離肉湯人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)Elisa測定試劑盒

定量檢測試劑盒肌測定培養(yǎng)基小鼠血管活性腸肽(VIP)Elisa測定試劑盒

血液人類巨細胞病毒蛋白酶（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法20次溴甲酚紫葡萄糖肉湯豬轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)Elisa測定試劑盒

定量檢測試劑盒酸性肉湯豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)Elisa測定試劑盒

體液人類巨細胞病毒蛋白酶（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法20次煙酸測定培養(yǎng)基豬髓磷脂堿性蛋白(MBP)Elisa測定試劑盒
禽流感通用/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）檢測試劑盒 (雙重?zé)晒?PCR法)GnRH ELISA Kit  大鼠促性腺釋放納米鋁粉 99.9% metals basis:,粒徑：50nm

LTB4 ELISA Kit  大鼠白三烯B4納米鐵粉 99.9%，50nm

LIFR ELISA Kit  大鼠白血病抑制因子受體納米鐵粉 99.9%，80nm

EGF ELISA Kit  大鼠表皮生長因子納米鉬粉 比表面積3-8m2/g, 粒度80nm，99.9%

iFABP ELISA Kit  大鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白納米鎳粉 比表面積10m2/g-60m2/g, 粒度20nm-100nm，99.9%

TE ELISA Kit  大鼠端粒酶銀 99.5%，60-120nm

MMP-5 ELISA Kit  大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5鎢 比表面積10-15m2/g,粒度20nm-100nm,99.9%

MMP-4 ELISA Kit  大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶44-叔丁基苯甲 97%

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

產(chǎn)品留言

標(biāo)題

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

內(nèi)容

驗證碼

點擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發(fā)送信息!
2.如有必要,請您留下您的詳細聯(lián)系方式!