商品屬性：
貨號 規(guī)格 產(chǎn)品名稱 A-Hc2003-50ml×2 50ml×2 TRzol LS（液體樣本 RNA 提取試劑） 儲存條件：
貨號
規(guī)格
產(chǎn)品名稱
A-Hc2003-50ml×2
50ml×2
TRzol LS（液體樣本 RNA 提取試劑）
（5）產(chǎn)物要求：為保證 PCR 產(chǎn)物完整，建議 72℃后延伸 5-10 分鐘。連接前使用瓊脂糖凝膠電泳檢測 PCR 產(chǎn)物的質(zhì)量和純度，如 PCR 產(chǎn)物為非單一性條帶，目的片段一定要切膠回收。如 PCR 產(chǎn)物為單一條帶，無引物二聚體，可取 1-3?l 的 PCR 產(chǎn)物直接連接。但若擴(kuò)增模板為質(zhì)粒 DNA，應(yīng)注意質(zhì)粒的抗性。由于 pBM40 載體為卡那抗性，以氨芐抗性的模板質(zhì)粒擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物直接連接后的產(chǎn)物可涂布在卡那抗性的 LB 平板上。以卡那抗性的模板質(zhì)粒擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物應(yīng)切膠回收后再連接。 （6） 片段用量：膠回收的 DNA 片段一般使用量為 50-100ng。對照片段為 5’端帶CACC四個堿基的全長 EGFP 基因的平末端產(chǎn)物，表達(dá)產(chǎn)物大小為 32.6kD。 （7） 往 T7 和 T7t 引物干粉管加 100?l **水即為 5?M 濃度的引物。
1.連接反應(yīng) 按下表，在一個 0.2ml PCR 管中依次加入
加完試劑后，輕輕混勻低速離心，使溶液集中在管 底。PCR 儀控溫 25℃反應(yīng) 15 分鐘，反應(yīng)結(jié)束后， 將離心管置于冰上，等待**轉(zhuǎn)化。如暫時不轉(zhuǎn)化， 可凍存于-20℃。
2. 轉(zhuǎn)化 （1）取 5μl 連接產(chǎn)物到 100μl 剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細(xì)胞中，輕輕混勻，冰浴 20-30 分鐘。 （2）42℃水浴中熱擊 30 秒鐘。 （3）立刻置于冰水浴中 2 分鐘。 （4）加入 900μl 無菌的不含***的 SOC 或 LB，37℃，200rpm 振蕩培養(yǎng) 60 分鐘。 （5）4000rpm 離心 1 分鐘，去掉部分上清，保留 100μl 用移液器輕吹菌體，充分懸浮菌液，取全部菌液涂布，然后 37℃培養(yǎng)過夜（12-16 小時）。 3. 陽性克隆鑒定： （1）菌落PCR方法鑒定陽性克隆 A.用10?l吸頭挑選克隆至預(yù)先加有10μl無菌水或LB培養(yǎng)基的PCR管中，吹打混合。 B.在25? l PCR反應(yīng)體系中加入2μl**懸液為模板、5μM濃度的CMVPfor和SV40PolyArev各1μl，PCR方法鑒定陽性克隆。B.在25?l PCR反應(yīng)體系中加入2μl**懸液為模板、T7和T7t各1μl，PCR方法鑒定陽性克隆。 C.PCR擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性5分鐘（裂解細(xì)胞，失活核酸酶），94℃變性10 秒鐘，55℃退火10秒鐘（注：使用基因特異性引物做PCR鑒定時，退火溫度則需按其*適溫度進(jìn)行調(diào)整），72℃延伸（ 根據(jù)片段的大小決定延伸時間，通常每1-2分/1kb），30-35個循環(huán)，72℃后延伸5分鐘。1%瓊脂糖凝膠電泳分析擴(kuò)增結(jié)果，有強烈的明顯條帶的克隆為重組體，與插入片段大小相近（由于擴(kuò)增引物在克隆位置的兩側(cè)，所以PCR擴(kuò)增出的DNA的長度比插入片段大349bp）可視為陽性克隆。菌落PCR方法鑒定重組體時一定要設(shè)立一個不加菌液的陰性對照。 （2） 限制性酶切分析陽性克隆 pBM30為低拷貝質(zhì)粒。挑取單菌落接種于8mL含卡那的LB培養(yǎng)液中，過夜培養(yǎng)，小量制備質(zhì)粒，參考pBM30圖譜，選擇合適的限制性內(nèi)切酶（NdeI，Bgl II，Kpn I，NcoI，Xho I），酶切后電泳鑒定重組質(zhì)粒。 （3） 測序：用T7和T7t對質(zhì)粒進(jìn)行測序分析。
公司正在出售的產(chǎn)品：
15min高產(chǎn)全基因組DNA提取試劑盒
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中量液RNA磁珠法提取試劑盒(M)
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犬血巴爾通體PCR試劑盒
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唾液RNA提取試劑盒
發(fā)動蛋白2ELISA試劑盒
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